王维娜 赵春兰 梁月勉 张文清 王晔兴

    乳腺癌为女性最常见的恶性肿瘤之一，严重危害女性的健康。乳腺癌的发生发展涉及多个基因异常，目前其发病机制尚不明确，为了提高患者生存率，迫切需要寻找新的治疗靶点。Nupr1/p8是1997年Mallo等[1]在研究急性胰腺炎的分子变化中发现的1个小分子核蛋白，研究表明Nupr1/p8参与了胰腺损伤、心肌肥大、性腺发育成熟、肝损伤、红细胞分化及糖尿病肾病变、软骨形成、皮肤衰老、体内多部位肿瘤等多种病理生理过程，显示了抗炎、细胞周期调控、自噬、细胞信号传导、细胞生长因子及抗凋亡等作用[2-4]。人类P8基因定位于染色体16p11.2，编码82个氨基酸组成的小分子核蛋白，相对分子量约8X103，故被命名为P8。后来Ree 等[5]在乳腺癌转移相关分子机制研究中克隆到的转移候选因子(candidate of metastasis 1,com-1)，经结构分析就是P8。随后P8、com-1又被统一命名为Nupr1(nuclear protein 1)。随后研究发现它在多种肿瘤中存在异常表达，主要通过控制细胞凋亡及参与细胞内信号传导，起到肿瘤生长启动子的作用，参与肿瘤的发生及进展，然而在某些研究中却发现了相反的作用[6]。国外一些学者研究了它在乳腺癌发生及进展中的作用，但不同的研究结果不太一致，所有研究均发现乳腺癌组织中Nupr1较正常组织表达增高，然而具体到它的表达与乳腺癌临床病理特征的关系，不同的研究得出的结论不尽相同[1-4]。关于Nupr1在体外肿瘤细胞中的作用机制目前国内笔者尚未见到相关研究报道。本研究通过沉默乳腺癌MDA-MB-231细胞的Nupr1基因，抑制Nupr1的表达。采用流式细胞术检测细胞凋亡，以MTT法检测细胞增殖情况，克隆形成实验检测细胞生长能力，Western blot法检测实验组细胞ki67和Survivin的表达，探讨Nupr1基因在乳腺癌细胞增殖、凋亡中的作用，进一步阐明Nupr1基因与乳腺癌发生、进展、预后的关系，以期更好地指导临床个体化治疗。

    1 材料与方法

    1.1 材料与仪器 人乳腺癌细胞株MDA-MB-231购自美国ATCC公司(ATCC,Manassas,VA)。RPMI 1640细胞培养液、胎牛血清、青霉素、链霉素均购自美国Gibco公司。ki67和Survivin抗体购自Santa Cruz;Nupr1引物由上海生物工程有限公司合成，qRT-PCR试剂盒购自。Nupr1 siRNA重组慢病毒及siRNA control重组慢病毒委托上海比昂公司协助构建(利用primer5软件设计人Nupr1的RNA干扰序列(5’-CAT GCC TAT CAC TTC A) ......