孙永 孙辉 姚凯华 李志锋 李永文

    作为一种常见的中枢神经系统退行性疾病，阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)又被称为老年性痴呆，其临床特征主要表现为进行性记忆障碍、认知功能障碍、行为失常及人格改变[1-3]。细胞间淀粉样斑块及大量的神经原纤维缠结是该病的主要病理学特征[4]。环境、遗传等被认为是导致发病的重要因素，淀粉样级联假说认为β-淀粉样蛋白聚集于细胞外形成纤维状，进一步发展为老年斑，引起局部组织发生炎症甚至导致神经细胞凋亡，但目前关于其发病机制仍未有明确定论[5,6]。微小RNA(MicroRNA,miRNA)是一类非编码的可调控基因表达的小分子RNA，在血清、乳汁、唾液及尿液等中均被检测到[7,8]。近年来，诸多研究表明miRNA与肿瘤、神经退行性疾病等多种疾病相关，血清中miRNA的种类和水平可用于反应疾病的类型、进展及机体的生理状况[9,10]。关于老年性痴呆患者血清中miR-221水平与认知功能的关系尚未见报道，因此本研究采用淀粉样蛋白(Aβ1-42)诱导AD大鼠模型，以探讨大鼠模型血清中miR-221的表达水平与认知功能的关系。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物、细胞株及主要试剂 8～12周龄SPF 级健康雄性Sprague—Dawley(SD) 大鼠[合格证号：SYXK(京)2013-0032]60只，体重200～300 g/只，于北京维通利华实验动物技术有限公司采购，将大鼠随机分笼，于60%～70%湿度、21℃～26℃室温下适应性饲养1周，期间让其自由饮水饮食。Aβl-42购自北京中杉金桥，使用前将其用无菌0.9%氯化钠溶液稀释至10 μg/μl，置于37℃作用1周，使其成聚集态。荧光定量PCR试剂盒及Trizol均购自为TAKARA公司。jet PRIME购自美国polyplus公司。miR-221过表达慢病毒及miR-221空载体对照由上海吉凯设计并构建。兔多克隆抗体to BACE1(Anti-BACE1抗体，ab2077)购自Abcam。

    1.2 大鼠建模 将60只大鼠随机分为Aβ1-42诱导的AD组、AD+miR-221过表达组、AD+空载体组及正常对照组，每组15只。Aβ1-42诱导的AD方法：采用腹腔注射10% 水合氯醛(30 mg/kg)的方法麻醉大鼠 ......