桂玉敏 彭建军 郭敬

    糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是一种以微血管异常、视网膜水肿、神经功能障碍和血-视网膜屏障(BRB)破坏为特征的进行性疾病，是糖尿病的主要并发症，也是成人失明的最常见原因[1]。视网膜色素上皮(RPE)细胞是外部BRB的重要组成部分，其选择性地调节分子流入和流出视网膜。有人提出，在糖尿病的情况下，持续的高血糖会阻碍RPE细胞增殖，从而促进糖尿病视网膜病变的进展[2]。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类内源性、小的非编码RNA，涉及广泛的生物过程。它们通过与靶基因mRNA的3'-非翻译区(UTR)结合来调节基因表达，引起mRNA降解和/或翻译抑制。目前已经鉴定出许多miRNA可以调节糖尿病视网膜病变的发病机制[3,4]。如，miR-21在糖尿病视网膜中表达上调，敲除miR-21可通过靶向调节过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPARα)改善糖尿病视网膜中新生血管和炎症[5]。有报道发现miR-200b可预防糖尿病视网膜病变中血管内皮生长因子(VEGF)介导的通透性和血管生成[6]。尽管有这些报道，许多在糖尿病中失调的miRNA尚未有功能表征。据报道，miR-204能够维持静止状态下BRB的稳定，是人类多种眼部疾病中关键的miRNA[7]。miR-204在多种恶性肿瘤如视网膜细胞瘤、胃癌、胶质母细胞瘤等细胞的增殖中发挥重要作用[8-10]，然而，miR-204在高血糖作用下对RPE细胞增殖的作用仍不清楚。本实验旨在探究miR-204在高糖诱导的RPE细胞增殖中的作用及可能的分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人视网膜色素上皮细胞ARPE-19购于中国科学院上海生命科学学院细胞库；DMEM培养基、MTT试剂、胎牛血清购于美国Sigma公司；优质胎牛血清、蛋白提取试剂盒、BCA蛋白浓度检测试剂盒、ECL化学发光检测试剂盒均购于上海碧云天生物技术研究所；Lipofectamine 3000转染试剂盒购于美国Invitrogen公司；miR-204 inhibitor、NC-inhibitor、miR-204 mimics和NC-mimics购于广州市锐博生物科技有限公司；RNA提取试剂盒购于北京康为世纪生物科技有限公司；逆转录试剂盒和荧光定量PCR检测试剂盒购于大连宝生物工程有限公司；PVDF膜购于美国Abcam公司；鼠抗人SIRT1抗体、鼠抗人β-actin抗体购于美国CST公司；辣根过氧化物酶标记的山羊抗鼠IgG购于美国Abcam公司；荧光素酶报告基因载体pGL3质粒和Dual-Luciferase荧光素酶报告基因检测试剂盒购于美国Promega公司 ......