李国风 张勤增 解丽君 姜红 李立萍 郝娜 张建新

    中风是导致残疾的重要原因之一，其损伤的相关危险因素主要包括：兴奋性损害、Ca2+超载、自由基及脂质过氧化、线粒体功能障碍、细胞凋亡、炎性细胞因子失衡等。目前，溶栓仍为临床治疗脑缺血的主要手段，但一部分患者在溶栓治疗后由于再灌注等原因导致病情加重。因此，有关脑缺血损伤的发病机制、预防措施及治疗手段成为当今医学研究的热点之一。硫化氢(hydrogen sulfide，H2S)是机体内一种重要的气体信号分子，研究表明，H2S在多种病理生理过程尤其是脑缺血过程中发挥着重要作用[1]。凋亡又称程序性细胞死亡，是一种由基因调控的主动而有序的细胞死亡过程。凋亡是参与缺血性脑损伤过程中细胞死亡的一种重要形式[2]。最近研究表明，H2S与凋亡密切相关，但其在凋亡过程中的确切机制尚不明确[3,4]，尤其是在脑缺血后引起的细胞凋亡过程中的作用尚不清楚。本实验采用免疫组织化学、Western blot、TUNEL等方法，观察H2S对局灶性脑缺血损伤后神经元凋亡率、Caspase-3、Bcl-2和Bax蛋白表达的影响，从凋亡途径探讨在H2S对大鼠局灶性脑缺血损伤作用的可能机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 动物：健康成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只，体重(265±15)g，由河北医科大学实验动物中心提供，合格证号：201108043。

    1.1.2 试剂：兔抗Caspae-3单抗武汉博士德公司；鼠抗bcl-2单抗美国Santa Cruz；鼠抗bax单抗美国Santa Cruz；分子量标准蛋白质中国上海生物工程公司；SP免疫组化检测试剂盒北京中山公司；N,N,N,N,-四甲基乙二胺(TEMED)，美国Sigma；其余试剂为国产分析纯。

    1.1.3 仪器：电泳仪DYY-Ⅲ7B型水浴电转膜仪DYY-Ⅲ40B北京市六一仪器厂；低温高速台式离心机Hitachi 20PI-52型日立公司；电子分析天平梅特勒-AE240瑞士梅特勒公司；超低温冰箱(-80℃) 日本SANYO公司；

    1.2 大鼠局灶性脑缺血模型制备 将40只大鼠随机分为5组，分别为假手术组、缺血模型组、H2S低剂量组、H2S中剂量组、H2S高剂量组，每组8只。大鼠10%水合氯醛350 mg/kg腹腔注射麻醉，分离左侧颈总动脉、颈外动脉、颈内动脉，用电热烧灼器将颈外动脉的分支烧断，结扎并游离颈外动脉主干一段，在颈外动脉游离段上剪开一小口，将预先制备好的尼龙线栓子插入 ......