桂玉敏 彭建军 郭敬

    视网膜母细胞瘤是视网膜中最常见的原发性恶性肿瘤，通常发生在婴幼儿时期，占所有儿童恶性肿瘤的3%左右[1]。目前，尽管视网膜母细胞瘤的治疗策略取得了一定的进展，但发生颅内及远处转移常危及患儿生命。鉴于此，有必要进一步探索视网膜母细胞瘤发生和发展的分子机制，并开发有效的治疗方法，包括分子靶向治疗。越来越多的证据表明，各种微小RNA(microRNA，miRNA)的异常表达通常存在于人类各种类型的癌症中，包括视网膜母细胞瘤，这表明miRNA在癌症发生和癌症进展中的潜在功能[2-4]。miRNA是一类单链，长度约23个碱基的非编码RNA，通过与mRNA的3'非翻译区(UTR)结合，作为其靶mRNA的负调节因子，导致靶向降解或翻译抑制。由于miRNA在癌症起始和进展中的调节功能，应当将miRNA的靶向作为新的治疗策略进行研究。多项研究表明，miR-375在食管癌、胃癌、骨肉瘤、宫颈癌等多种类型的癌症中异常表达，发挥抑癌基因的作用[5-7]。然而，目前，miR-375影响人视网膜母细胞瘤细胞生物学过程的潜在分子机制仍然很大程度上未知。因此本研究探讨miR-375对人视网膜母细胞瘤细胞增殖和凋亡的影响，并探究其靶基因，以期为视网膜母细胞瘤的靶向治疗提供新的作用靶点。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人视网膜母细胞瘤Y79细胞购自中国科学院上海细胞库；RPMI1640培养基、胰蛋白酶和青链霉素购自美国Gibco公司；胎牛血清购自美国Hyclone公司；MTT试剂、二甲基亚砜购自美国Sigma公司；miR-375 mimics及阴性对照NC mimics购自广州市锐博生物科技有限公司；Lipofectamine 2000转染试剂购自美国Invitrogen公司；Trizol试剂、逆转录试剂盒购自北京康为世纪生物科技有限公司；AnnexinⅤ-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒和SYBR Green PCR Master Mix试剂盒购自日本TaKaRa公司；细胞裂解液、BCA蛋白浓度检测试剂盒及Western blot相关试剂购自碧云天生物技术研究所；Pax6抗体、GAPDH抗体及辣根过氧化物酶标记的二抗购自美国Abcam公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司 ......