孙宾 刘多凤 陈建华

    EMT; invasion; metastasis

    膀胱癌是常见的泌尿系统恶性肿瘤之一，发病隐匿，转移率高。早期膀胱癌患者中，肌层浸润性膀胱癌约占30%左右，其中1/2的患者发现时已出现远处转移。发生转移后患者的生存率明显下降，即使采用手术切除与联合化疗方法治疗，5年的生存率不足30%[1]，因此预防和控制膀胱癌向深处浸润和远端转移是目前医学工作者不断探索的难题。有研究报道上皮间质转化(EMT)是癌细胞出现转移的驱动力，因此研究EMT发生分子机制，是提高肿瘤诊治的关键[2]。磷脂酰肌醇特异性磷脂酶Cepsilon(PLCε)作为癌基因Ras的效应分子，近年来发现其在恶性肿瘤的发生发展过程中起着关键作用[3,4]，有文献报道PLCε在膀胱癌组织中呈现高表达状态，且能够促进癌细胞发生EMT和转移[5]。miRNA作为全长含有20～25个核苷酸的小分子RNA，能够通过与靶基因mRNA的 3’端结合，从而抑制靶基因翻译。有文献表明miRNA在肿瘤的增殖、转移和侵袭过程中起着至关重要的作用[6,7]。有研究发现miR-205在乳腺癌[8]、卵巢癌[9]中起到促癌基因作用，在胃癌[10]中起到抑癌基因的作用，但其在膀胱癌中的研究笔者尚未见报道。本研究采用生物信息学工具预测靶向调控PLCε的miRNA，同时上调/沉默miR-205表达，观察对膀胱癌T24细胞EMT和迁移的影响，为治疗膀胱癌提供新的方法。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2017年1月至2018年12月于我院就诊且经病理学确诊的膀胱癌患者癌组织及癌旁组织80例，其中男40例，女40例；年龄35～60岁，平均年龄(40.45±7.54)岁；术前患者均未进行放化疗。患者及家属签署知情同意书。膀胱癌T24细胞采购自ATCC细胞库。

    1.2 试剂与仪器 胰蛋白酶、qRT-PCR检测试剂盒购自碧云天生物技术有限公司；RPIM1640细胞培养基购自购自美国Gibco公司；Trizol总RNA 提取试剂盒购自广东锐博生物科技技术股份有限公司；miR-205 inhibitors、miR-205mimics和阴性对照由上海吉玛制药技术有限公司代为合成；Lipofectamine 2000购自美国 Invitrogen 公司；青、链霉素购自华北制药有限公司、SYBR Premix Extaq system 日本 Takara 公司、Transwell小室及相应产品购自美国Corning公司；细胞培养箱采购自上海三腾仪器有限公司。PTEN 兔抗 (WB)、PTEN 兔抗 (IHC)、Occludin 兔抗购自美国abcam公司、二抗(IHC)、Actin 鼠抗购自Fermentas 公司 ......