孙耀辉 宋继权 柯锦

    恶性黑色素瘤是一种由黑色素细胞恶化形成的肿瘤，在所有恶性肿瘤中其发病率相对较低，但增长速度最快[1]。传统治疗方法包括早期手术切除、放疗及化疗，目前靶向治疗在抗肿瘤领域中发挥重要作用，靶向治疗对晚期患者的治疗更准确、更有效[2]。研究发现，微小RNA(microRNA，miRNA)可通过靶向相关信号通路调控黑色素瘤的发生和发展，为临床防治恶性黑色素瘤提供新的视角和靶点[3]。研究发现，miR-130a-3p在黑色素瘤细胞中下调表达，其可能参与调控黑色素瘤细胞上皮-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)过程[4,5]。信号转导子与转录激活子3(signal transducers and activators of transcription，STAT3)在皮肤恶性黑色素瘤中高表达，与肿瘤的细胞生长、浸润深度和淋巴结转移密切相关[6]。但miR-130a-3p是如何参与调控黑色素瘤细胞增殖、迁移等生物行为的具体机制目前还不清楚，本文旨在研究miR-130a-3p对恶性黑素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制是否和STAT3相关。

    1 材料与方法

    1.1 材料 黑色素瘤细胞A2058、WM239和正常人黑色素细胞HEMn均购自中国科学院上海细胞库；胎牛血清、RPMI-1640培养基、胰蛋白酶购自美国Gibico公司；LipofectamineTM2000转染试剂购自美国Invitrogen公司；二甲基亚砜(DMSO)、BCA试剂盒、PBS缓冲液购自Sigma公司；Trizol试剂、双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自北京Solarbio公司；反转录试剂盒、荧光定量试剂盒购自日本TaKaRa公司；Transwell小室、Matrigel胶购于美国BD公司；CCK-8试剂盒、膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙锭(PI)试剂盒、RIPA蛋白裂解液、SDS-PAGE试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；抗体均购自上海煊翎生物科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养:黑色素瘤细胞A2058、WM239和正常人黑色素细胞HEMn使用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基于37℃、5% CO2饱和湿度条件下培养，每天换液1次，待细胞融和至60%～70%时，加入胰蛋白酶进行消化传代，选取处于对数生长期的细胞进行实验。

    1.2.2 细胞转染与分组:取常规培养的黑色素瘤细胞A2058用0.25%胰蛋白酶消化后接种于96孔板中 ......