贾国炳

    胃癌起源于胃黏膜上皮的恶性肿瘤，在全球恶性肿瘤中发病率第四位，在中国占首位，40%患者确诊时胃癌已发生转移[1]，严重影响患者生命安全。肿瘤生长需要氧气的供应，但随着实体瘤的生长，多种结构异常导致肿瘤组织中氧分压低于正常组织[2]。低氧微环境是实体瘤的常见特征，低氧时最先刺激低氧诱导因子(hypoxia inducible factor-1，HIF-1)过表达，进而促进细胞增殖和迁移[3]。同时低氧时多种微小RNA(microRNA，miRNA)表达异常，miR-210是缺氧诱导的miRNA之一，缺氧时在胃癌组织中高表达，与胃癌组织的发生、发展有关[4]。但miR-210与HIF-1α在低氧条件下对胃癌细胞的影响尚不明确。因此本研究以人胃癌细胞系SGC-7901为研究对象，检测低氧条件下miR-210和HIF-1α的变化与细胞增殖、迁移的关系，为寻找新的胃癌靶基因位点提供一定的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞:人胃癌细胞SGC-7901购自中国科学院上海细胞库。

    1.1.2 主要试剂：氯化钴(CoCl2)购自苏州斌顺化工有限公司，货号：7646-79-9。RPMI1640培养基、胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO)、Trizol均购自美国ThermoFisher公司。CCK-8试剂盒、蛋白提取试剂盒、BCA试剂盒、PVDF膜均购自碧云天生物科技有限公司，货号分别为：C0037、P0033、P0012S、FFP32。miRVana miRNA提取试剂盒购自美国Ambion公司。2×Hi SYBR Green QPCR Mix购自日本TaKaRa公司，货号：ARR041A。一抗HIF-1α(抗鼠)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)(抗兔)、胰岛素样生长因子Ⅱ mRNA结合蛋白3(insulinlike growth factorⅡ mRNA-binding protein 3，IMP3)(抗兔)、β-连环蛋白(β-catenin)(抗兔)、内参甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)(抗兔)均购自美国Abcam公司 ......