杨宋玲 张庆平 曾秋玲 宁景春

    内皮祖细胞(endothelial progenitor cells，EPCs)在内皮细胞维持中发挥重要作用，参与内皮化和新生血管的形成[1]。EPCs的这一优点对以缺血组织再生为目标的细胞治疗具有吸引力，体外扩张EPC可能有助于缺血性疾病的潜在临床细胞治疗。静脉注射自体EPCs是可行和安全的，并可能对特发性肺动脉高压成人的运动能力和肺血流动力学有有益的影响[2,3]。虽然这些研究为临床应用EPCs提供了各种见解，但潜在的细胞治疗方法的一个主要限制是循环血液中EPCs的数量有限(1 材料与方法

    1.1 材料 循环EPC的分离与培养:用Ficoll密度梯度离心法从健康志愿者的外周血中分离出单核细胞(MNCs)，并在199σ培养皿中培养，培养皿中加入10%胎牛血清和VEGF(50 ng/ml,Chemicon)。在激光扫描聚焦显微镜下，EPCs表现为黏附细胞双阳性，可吸收dildl并结合凝集素。通过流式细胞术显示KDR、CD34和AC133的表达，进一步证明了它们的存在。医学伦理学问题:所有实验程序经医学和健康研究伦理委员会批准，参与者在入组前均提供书面知情同意书。

    1.2 方法

    1.2.1 菌落分析:培养4 d后，用EDTA轻轻分离粘附细胞。用100 ng/ml人重组VEGF将细胞(1×105)接种于甲基纤维素板中。平板在显微镜下进行研究，培养10 d后由两名独立研究者对菌落进行计数。

    1.2.2 EPCs增殖试验:通过加入5-溴-2-脱氧尿苷(brdu)来评估EPC的增殖。细胞(1×104细胞/孔)在96孔塑料板中培养。将Brdu(10 μm)添加到培养基和细胞再培养18 h。根据说明书，用细胞增殖酶联免疫吸附测定试剂盒(Roche Diagnostics，Mannheim，Germany)测定BrdU掺入量 ......