张红素 冯梅

    急性心肌梗死则是导致冠心病患者猝死的主要原因，在心肌恢复血流灌注后，可能导致心肌进一步受损，表现为心肌顿抑、及再灌注性心律失常，这种现象被称为心肌缺血-再灌注损伤(MIRI)[1]。研究表明，MIRI病理进展与细胞内钙超载、氧化应激损伤、炎性反应激活、心肌细胞凋亡等有关[2]。Akt/eNOS信号通路MIRI后心肌细胞的保护通路之一，主要通过Akt的磷酸化发挥心肌细胞抗凋亡作用[3]。研究表明，MIRI时Akt磷酸化水平提高可诱导eNOS产生进而发挥心肌保护作用，eNOS的高表达可防止细胞内钙超载、调节心肌血流，抑制血管痉挛、减少炎性细胞浸润等环节[4,5]。芦荟苷(Barbaloin,BAR)，作为芦荟的重要活性物质，是从芦荟中提取得到的蒽醌类化合物，既往研究显示，BAR可能通过激活AMPK信号通路抑制心肌缺血再灌注引起的心肌细胞凋亡[6]。本研究探索BAR预处理对于MIRI时心肌氧化应激水平、心肌细胞凋亡及Akt/eNOS信号通路的影响。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 12周龄SPF级雄性SD大鼠72只，体质量200～230 g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，动物合格证号：0016759。

    1.2 药品与试剂 芦荟苷(北京贝尔兰科生物科技有限公司提供，批号：110787)；地尔硫卓(河南省国药医药有限公司，批号：42399-41-7)；戊巴比妥钠(Bio-Rad公司)；0.9%氯化钠注射液(安徽双鹤药业有限责任公司)；大鼠一氧化氮(NO)及总抗氧化能力(TAOC)化学发光定量检测试剂盒(Thermo Fisher公司，批号：S0023；S0121)；大鼠丙二醛(MDA)，超氧化物歧化酶(SOD)，过氧化氢酶(CAT)，谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px) Elisa试剂盒(南京建成生物科技有限公司提供)；Annexin V-FITC/PI双染法细胞凋亡检测试剂盒(上海博谷生物科技有限公司)；山羊抗大鼠内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)及磷酸化内皮型一氧化氮合酶(p-eNOS)抗体，小鼠抗大鼠蛋白激酶B(Akt)抗体及磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)抗体(Abcam公司)；小鼠抗山羊及兔抗小鼠二抗(中衫金桥)；DAB显色剂(Solarbio公司)。

    1.3 仪器 大鼠TOPO呼吸机(赞德仪器有限公司)； 酶标仪(BioTek Epoch，美国伯腾仪器有限公司)；Attune NxT流式细胞仪(Thermo Fisher公司)；电泳仪(Bio-Rad，美国伯乐公司)；高速冷冻离心机(Eppendor-5810R ......