刘新宁 曹滨滨 刘杰 毕建年 赵亮

    骨关节炎(OA)是一种常见的关节软骨病变，以继发性骨质増生为主要的病理表现，致病原因由于过度劳损、衰老损伤、先天关节崎形等原因导致关节软骨破环、关节间隙狭窄、滑膜增生等，是困扰中老年人的健康的重要疾病之一[1-3]。患者长期忍受OA带来的困扰，极大影响生活质量，给家庭带来负担，给社会造成经济损失[4]。因此寻找新的治疗OA的方法成为医学工作者不断探寻的课题。软骨细胞是关节内合成分泌的重要细胞，能够调控关节内环境的稳定性[5]，当关节内环境紊乱时，软骨细胞识别异常作出应答，调整细胞外基质的合成[6]，保持关节内环境的稳定。因此软骨细胞OA是研究OA机制的好思路。Wnt/β-catenin是机体内重要的信号通路，广泛参与多种细胞的生命活动，如组织分化、损伤再生、细胞内环境维持、抗应激损伤等[7]。研究表明Wnt/β-catenin通路的激活影响软骨细胞的的增殖、分化、移行，在维持骨关节的正常结构、修复损伤过程中Wnt/β-catenin通路起重要的作用[8]。阿魏酸是从植物细胞壁提取的低毒、多酚类化合物[9]。研究表明阿魏酸具有抗氧化、抗血栓、抗炎症、抗血脂等作用，具有强大的抗炎、修复、治疗作用，广泛应用于医药领域和食品领域[10]。本研究采用LPS诱导的OA软骨细胞为模型，从Wnt/β-catenin信号通路入手探讨阿魏酸对OA软骨细胞的保护作用，为治疗OA提供理论支撑。

    1 材料与方法

    1.1 试验材料与主要试剂 清洁级新西兰大白兔购自福建医科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(闽)2004-000；阿魏酸、LPS、Ⅱ型胶原酶采购自Sigma公司；胰蛋白酶、DMEM培养基、Ⅱ型胶原抗体购自武汉博士生物工程有限公司；BCA蛋白浓度测定试剂盒化学发光试剂盒购自广东锐博生物科技技术股份有限公司；兔抗MMP-13、兔抗COL2、兔抗大鼠wnt2、兔抗大鼠磷酸化GSK-3p (p-GSK-3p)(Ser9)抗体、兔抗β-catenin、兔抗GAPDH以及山羊抗兔IgG采购自美国abcam公司。

    1.2 软骨细胞分离培养 从健康的4月龄新西兰大鼠膝盖中取软骨细胞，0.25%胰蛋白酶消化，37℃ 消化30 min，弃去胰蛋白酶，加入DMEM培养基过夜，1 200 r/min离心10 min，弃上清 ......