邹强生 魏贞 蒋婷 李姗

    肝细胞肝癌是一种病死率较高的原发性肝癌，癌细胞排列形成实性团块状，周围富有扩张的血窦，且癌细胞界限不清，大小一致[1]。肝细胞肝癌流行病学调查显示，发病地区以非洲、东亚地区为主，大洋洲、南北美洲、欧洲等发病率较低[2]。C1orf 61是一种促进肝癌发生和发展的较为重要的因子，随着肝癌病程的延长，C1orf 61表达水平逐渐升高。且有研究表明，C1orf 61可促进细胞的增殖和克隆；C1orf 61和骨肉瘤、骨髓瘤及肝细胞肝癌的发生发展有关，C1orf 61在正常骨组织中的表达量高于异常骨组织，在骨骼瘤疾病中表达量较低，但在正常肝组织中与之相反，在正常肝组织中的表达相对较低，在肝硬化或者肝癌组织中的表达水平中显著升高[3]。研究C1orf 61是否参与肝细胞肝癌的发生发展，在本文实验中观察C1orf 61对肝细胞肝癌细胞迁移能力的影响及作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 研究细胞：肝细胞肝癌细胞HepG2细胞，购于武汉普诺赛生命科技有限公司，本次研究中的相关事宜均获得我院伦理委员会批准。

    1.1.2 主要试剂：小鼠抗人C1orf 61抗体(购于美国Gene Copoeia)，兔抗人E-cadherin抗体(购于义翘神州生物技术有限公司)，MTT试剂盒、Transwell试剂盒(均购自于武汉博士德生物工程有限公司)；PBS缓冲液(购自于北京中杉金桥生物技术有限公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养：将冻存的肝细胞肝癌细胞HepG2细胞取出后，快速采用40℃温度火浴，迅速摇晃均匀到融化，加入2 ml的培养基[10%PBS，10%～15%56 ml胎牛血清，1%的5.56 ml双抗(青链霉素)，500 ml RPMI-1640培养基]，1 000 r/min，离心5 min处理，弃上清液，使用完全培养液重悬，之后进行传代至培养瓶中，培养基加至5 ml，在CO2培养箱中培养(湿度饱和95%。温度37℃、CO2浓度5%)，第2天换液，当培养瓶中细胞融合率达80%～90%进行传代。

    1.2.2 转染及分组：取对数生长期HepG2细胞，每孔中大约20×104个HepG2细胞，接种于6孔板中，对其进行培养，培养24 h后 ......