吴贵福 董春萍 高珊 李辉

    糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病初期的微血管并发症，已成为主要的致盲性疾病之一。DR的发病机制尚不十分明确，一般认为高血糖是引起糖尿病患者视网膜损伤的重要因素[1]，细胞凋亡和氧化应激贯穿DR发病的过程。流行病学调查显示，我国糖尿病患者居全球首位，DR发病呈增长趋势，严重影响患者视力健康[2]。DR治疗方法或手段较多，西药治疗存在一定的局限性，不能从根本上治愈DR。由于中草药具有低毒、不良反应少等优点，中医疗疗法在DR的治疗中得到广泛应用[3]。薯蓣皂苷是中药穿山龙的有效成分，具有抗炎、镇痛、调节免疫等作用，其对糖尿病周围神经病变的防治作用也日益受到关注[4]。研究表明，薯蓣皂苷可增强糖尿病合并颈动脉粥样硬化患者血清SOD、GSH-Px等抗氧化酶的活性，清除血液及组织中的氧自由基及MDA，防止血管内皮的氧化损伤[5]。薯蓣皂苷可提高氧化低密度脂蛋白诱导的血管内皮细胞eNOS表达，促进NO的合成与释放，从而降低血管内皮细胞的凋亡[6]。微小RNA(micro RNA，miRNA)是一类长度为18～25个核苷酸的小分子非编码RNA，参与多种疾病的发生、发展。研究表明，miR-146a在糖尿病周围神经病变患者外周血中的含量降低，且miR-146a低表达与患者的病情严重程度密切相关[7]。miR-146a在DR患者血清中表达降低，NF-κB和VEGF明显增加，miR-146a可能通过介导炎症反应和血管增生参与DR的发病过程[8]。目前，薯蓣皂苷和miR-146a对高糖诱导的大鼠视网膜血管内皮细胞(RRVEC)损伤的影响，以及薯蓣皂苷是否通过调控miR-146a影响大鼠RRVEC损伤还未见报道。本研究主要探讨了薯蓣皂苷对高糖诱导的大鼠视网膜血管内皮细胞损伤的影响及作用机制，以期为DR的治疗提供新的作用靶点和新型药物的开发提供一定的理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验试剂 清洁级SD大鼠，北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证号:SCXR(京)2015-005。薯蓣皂苷粉由国家天然药物研究中心提供，纯度为98%；胎牛血清(FBS)和L-DMEM培养基美国Gibico公司；荧光(Cy3)标记羊抗兔IgG购自武汉博士德生物有限公司；Trizol试剂、反转录试剂盒和PCR试剂盒购自Invitrogen公司；引物序列由宝生物工程(大连)有限公司 提供；BCA蛋白测定试剂盒购自碧云天公司；Bcl-2、Bax和Cleaved-caspase-3以及内参GAPDH抗体购自美国Santa Cruz公司；ROS、SOD和MDA试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；LipofectamineTM2000试剂盒购自上海瓦兰生物科技有限公司 ......