王月 黄冬梅 张永红 雷凤

    急性心肌梗死是一种严重的缺血性心脏病，可导致心律失常、心力衰竭等多种预后不良的并发症。患者一般具有冠状动脉粥样硬化的病理基础，在激动、过劳、暴饮暴食、寒冷等因素的刺激下，可导致粥样斑块破裂、血栓形成或动脉痉挛，从而诱发心肌梗死的发生[1]。尽快实施经皮冠状动脉介入术是治疗急性心肌梗死的有效方法，但是快速的循环重建会不可避免的导致心肌细胞受到缺氧复氧损伤[2]。研究发现，缺氧复氧损伤的病理机制可能包括炎症的级联扩大、氧化应激失衡、脂质的过氧化、钙离子的过载、心肌细胞的凋亡与自噬等[3]，但是部分病理过程的关键环节尚不明确，可能是目前治疗研究结果并不理想的主要原因。Paralemmin-3(PALM3)是Paralemmin蛋白家族的成员之一，在1992年首次于非洲爪蛙中发现，可能作为中间分子参与调节Toll样受体/白介素-1受体(Toll like receptor/Interleukin-1 receptor，TIR)信号通路[4,5]。Chen等[6-8]发现，PALM3可以与单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白(single immunoglobulin IL-1 receptor-related molecule，SIGIRR)的羧基端相互结合，抑制SIGIRR的表达，而SIGIRR是TIR信号通路中关键的负性调控因子。抑制PALM3的表达可减轻脂多糖诱导的炎性反应，可能与上调SIGIRR表达，从而抑制TIR信号通路有关[9,10]。TIR信号通路也参与缺氧复氧损伤的炎症级联扩大[11,12]，但是PALM3在其中的作用尚不清楚。因此，本文探讨PALM3在缺氧复氧致心肌细胞损伤中的表达变化，并且使用RNA干扰技术沉默PALM3表达，以研究其在缺氧复氧损伤中的具体作用。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂 大鼠H9c2细胞购置于中科院上海细胞库；胎牛血清、DMEM培养基、胰酶购置于美国Gibco公司；靶向序列与引物序列合成于上海生物工程有限公司；LipofectamineTM 2000购置于美国Invitrogen公司；BamHⅠ酶、HindⅢ酶、Trizol试剂盒、逆转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒购置于日本Takara公司；pGenesil-1.1质粒购于武汉晶赛生物技术有限公司；蛋白质裂解液、BCA蛋白定量试剂盒、ECL发光试剂盒购于上海碧云天生物技术有限公司；PVDF膜购于美国Millipore公司；MTT、二甲基亚砜购于美国Sigma公司；一抗均购于英国Abcam公司；二抗均购于武汉三鹰生物技术有限公司 ......