陈丹 李媛媛 赵俊

    宫颈癌是发病率最高的妇科恶性肿瘤，高复发率以及高转移性是宫颈癌预后不良的主要原因，严重威胁着女性的身体健康[1]。近年来，尽管宫颈癌手术以及放化疗技术取得了很大的发展，但是中晚期宫颈癌患者预后仍然极差[2]。因此，进一步寻找宫颈癌发病的分子机制对于改善中晚期患者预后具有重大意义。近年研究发现，非编码RNA在肿瘤的增殖以及侵袭转移等恶性进程中起着关键调控作用，如miRNA以及lncRNA等[3-7]。微小RNA即miRNA，一类长链非编码RNA，其长度为19～25个核苷酸[8]。miRNA主要通过结合靶基因的3’非翻译区，调节基因转录后水平从而干预肿瘤的发生发展[9]。研究发现，宫颈癌细胞中亦存在较多差异表达的miRNA[10-13]，这些差异表达的miRNA可能成为宫颈癌分子靶向治疗的潜在靶点。有研究报道miR-17在乳腺癌以及肺癌中均出现差异表达，且差异表达的miR-17与肿瘤增殖密切相关[14,15]。miR-17在宫颈癌细胞中表达显著降低[16]，但其在宫颈癌中的发病机制尚未完全阐明。Akt又名蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB)，当前的研究结果表明AKT通路在细胞的增殖与凋亡过程中起着关键调节作用[17]。TargetScan软件预测结果表明Akt2为miR-17的靶向调控基因，因此我们猜测miR-17可以通过靶向调控Akt2/Foxo1A/Bcl-2通路抑制宫颈癌细胞的增殖。本研究以上述背景为基础，以Hela细胞株为研究对象，证实miR-17与Akt2的靶向调控关系，并通过多种实验验证miR-17靶向调控Akt2从而促进宫颈癌细胞增殖。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 收集2017年8～12月在我院行手术切除的宫颈癌患者手术标本23例，包括癌组织以及癌旁正常组织，入组患者均具有完善的病历资料。纳入标准：(1)初诊患者，术前无放化疗以及内分泌治疗史；(2)术后病理确诊为宫颈癌患者。排除标准：(1)合并其他恶性肿瘤如乳腺癌、卵巢癌等其他恶性肿瘤病史；(2)无心功能以及肝肾功能障碍；(3)合并传染病史如艾滋病、梅毒以及肝炎等。标本离体后30 min内切取新鲜的癌组织以及癌旁正常组织，并将其置于装有RNA保存液的冻存管中，放于-80℃冰箱备用。

    1.2 主要试剂与仪器 miR-17 mimics、inhibitor及对照组NC(普健生物科技有限公司，武汉)，蛋白酶抑制剂、PMSF(浩然生物技术有限公司，上海)，Trizol试剂(Thermo Fisher公司 ......