高杨 李盛涛 郝文伟

    胃癌是我国第二大恶性肿瘤[1]，我国胃癌发病率高、转移率较高、死亡率较高，而且早诊断率低、根治切除率低，放化疗和手术是主要的治疗手段[2]。因此寻找有效的药物治疗方法尤为重要。研究表明中医药能够多靶位、多环节抑制胃癌的发生发展与转移[3]，紫杉类药物是治疗胃癌的新高效药，与其他药物联合治疗毒副作用小[2]。用参苓白术散加减配合治疗化疗胃癌术后患者可减轻化疗药物不良反应[4]；养正消积胶囊能有效杀死癌细胞、提高机体免疫力、增强化疗药物敏感性等多种功能[5]。桃青皮提取物具有很强的抗菌和抗真菌效果[6]；能抑制体外肿瘤细胞的增殖，直接杀死肿瘤细胞[7,8]；可明显抑制Lewis肺癌细胞的增殖[9]；可抑制Hela细胞增殖上调caspase-3蛋白表达[10]。本实验研究核桃青皮提取物对胃癌细胞增殖和转移的影响，且分析核桃青皮提取物和IL-6/STAT3之间关系。为胃癌的预防和药物治疗提供实验依据以及新靶点。

    1 材料与方法

    1.1 细胞 胃癌BGC-823细胞株胞购自中国科学院上海细胞库。

    1.2 材料与试剂 胎牛血清、RPMI 1640培养基购自美国Gibco公司；RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、 qPCR SYBR? Green Mix购自Takala生物公司；四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)、蛋白提取试剂盒、BCA 试剂盒均购自上海碧云天公司；细胞板、酶标仪购自赛默飞公司。

    1.3 方法

    1.3.1 核桃青皮提取液制备:参考文献[8]，核桃青皮用95%的乙醇萃取4次，风干得到的微细粉即为核桃青皮粗提取物。

    1.3.2 细胞培养:胃癌BGC-823细胞常规培养于含10 % FBS的RPMI 1640培养基，置于37℃，含5% CO2恒温箱培养。每2～3天传代一次。

    1.3.3 细胞分组:取对数生长的BGC-823细胞分别消化接种于96孔板(5×103个/孔)培养到细胞贴壁后换成相应浓度的核桃青皮提取物培养液或IL-6，再培养48 h。实验分为核桃青皮提取物0 μg/ml组、核桃青皮提取物10 μg/ml组、核桃青皮提取物20 μg/ml组、核桃青皮提取物40 μg/ml组、核桃青皮提取物80 μg/ml组、对照组(无核桃青皮提取物)、核桃青皮提取物组(浓度20 μg/ml)、核桃青皮提取物+IL-6组(核桃青皮提取物浓度20 μg/ml、IL-6浓度100 ng/ml) ......