罗清勇 冯鹏 张宗平

    前列腺癌占全球所有癌症病例的12%，是男性中第二常见的癌症[1]。对于前列腺癌的治疗，主要使用放射疗法或根治性前列腺切除术和激素消融疗法，然而，这些方法不能提高患者的存活率，并且近30%的患者经历了根治性前列腺切除术后复发[2]，因此，与前列腺癌发生相关分子机制的全面表征是十分必要的[3]，有助于提高患者的生存和增加当前治疗选择。微小RNA(microRNA，miRNA/miR)是转录后调控基因表达的小型非编码RNA，是非编码基因组的一部分。大量数据表明，miRNA是许多疾病(包括癌症)的潜在生物标志物，其异常表达与前列腺癌的潜在机制有关[4,5]。有研究用miRNA芯片技术对正常前列腺组织和前列腺癌组织进行筛选，发现miR-320e在前列腺癌组织中的表达明显上调[6,7]，并发现miR-320e高表达可增强胰腺癌细胞耐药性、促进细胞增殖[8]，但miR-320e对前列腺癌细胞生物学行为的影响及其机制尚不清楚。基于此，本研究以体外培养的前列腺癌细胞DU145为对象，评价miR-320e在前列腺癌细胞增殖和凋亡中的作用，并利用生物学信息预测其可能的靶基因脆性组氨酸三联体(fragile histidine triad，FHIT)，旨在揭示miR-320e影响前列腺癌细胞增殖和凋亡的相关机制。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂 前列腺癌细胞DU145和前列腺正常上皮细胞RWPE-1购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心，RPMI1640培养基、胎牛血清购自美国Hyclone公司，噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)、RIPA裂解液购自美国Sigma公司，miR-320e、anti-miR-320e、pcDNA3.1-FHIT、si-FHIT、双荧光素酶载体购自上海GenePharma公司，TRIzol、逆转录试剂盒、Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司，qPCR试剂盒购自日本TaKaRa公司，SDS-PAGE蛋白上样缓冲液、双萤光素酶报告基因检测试剂盒购自上海碧云天生物技术研究所，聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride，PVDF)膜购自美国Millipore公司，甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、P21、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2 ......