张娟 陈家斌 陈龙 彭沛 余凤荣

    糖尿病肾病(DN)是导致糖尿病及慢性肾衰竭死亡的重要原因之一，主要表现为肾小球系膜细胞增生小管间质扩张，肾小球系膜区和小管间质细胞外基质积聚等，最终导致肾小球硬化、肾脏纤维化[1]。DN的发病机制尚未完全阐明，研究发现多种miRNA参与系膜细胞损伤，在肾脏纤维化过程中发挥重要作用[2]；还参与肾小管间质纤维化，与糖尿病肾病的发生、发展相关[3]。缺氧诱导因子HIF2α在透明细胞肾细胞癌中能增强肿瘤生长，而抑制miR-30c-2-3p表达可以增强HIF2α表达，说明miR-30c-2-3p与肾细胞癌的进展相关[4]。增加miR-30c-2-3p的表达可提高足细胞的活力，同时可增加Nephrin和Podocin蛋白的表达[5]。但miR-30c-2-3p对肾小球系膜细胞凋亡的影响还不清楚。髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)是血红素过氧化物酶超家族成员之一，也是一种炎性指标，在炎症的发生发展过程中具有重要作用，与多种疾病相关[6]。在高糖的人肾小球系膜细胞中MPO、蛋白的表达增加[7]，MPO与空腹血糖水平呈正相关，在糖尿病微血管病变机制中起着十分重要的作用，检测MPO及空腹血糖浓度，对于糖尿病并发微血管病变的预防和治疗具有重要的意义[8]。但miR-30c-2-3p是否通过MPO影响肾小球系膜细胞的进展还不清楚，本文旨在研究miR-30c-2-3p对高糖诱导的肾小球系膜细胞凋亡及炎症反应的影响以及是否通过MPO发挥作用，为糖尿病肾病的诊断、治疗和预后提供新的思路和新靶点。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人肾小球系膜细胞HMC购自中国科学院上海细胞库；胎牛血清、DMEM培养基、胰蛋白酶、二甲基亚砜(DMSO)、BCA试剂盒、PBS缓冲液购自美国Sigma公司；Lipofectamine TM 2000转染试剂盒购自美国Invitrogen公司；Trizol试剂、反转录试剂盒、荧光定量试剂盒购自日本TaKaRa公司；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙锭(PI)试剂盒、双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自北京Solarbio公司；抗体均购自上海煊翎生物科技有限公司；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒购自上海联科生物技术有限公司；RIPA蛋白裂解液、PVDF膜、SDS-PAGE试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司 ......