张攀 孙艳美 张萍萍 马聪 苗绘 李亚丽

    自然流产的临床发生率10%～15%，超过80%的自然流产发生在妊娠早期[1]。目前自然流产的发病机制尚不清楚，导致自然流产的因素包括遗传、内分泌、感染、解剖因素及母体自身免疫系统疾病等，其中遗传因素尤其是胚胎染色体异常是自然流产发生的主要原因，约占早期自然流产的50%[2]。研究发现70%的偶发性流产是由胚胎染色体异常引起的[3]。本研究通过高通量测序及传统G显带技术对自然流产组织物进行了细胞遗传学分析，探讨不同检测方法的优缺点，为临床遗传咨询提供参考。

    1 资料与方法

    1.1 一般资料 选择2016年9月至2017年3月于河北省人民医院生殖遗传科就诊的自然流产患者192例为研究对象，平均流产年龄(29.40±4.18)岁，终止妊娠平均孕龄(9.23±2.53)周。患者均经超声确认宫内妊娠，并提示胚胎停止发育，且排除外伤、感染、发热等因素所致，在充分实验告知并签署知情同意书的原则下，于无菌条件下采取胚胎绒毛组织，进行高通量测序或细胞遗传学G显带检测。

    1.2 方法 经研究对象本人签署知情同意书后采集绒毛组织标本，收集刮宫后的绒毛组织，用0.9%氯化钠溶液充分洗涤绒毛组织至无明显血液残留，取新鲜标本送检或-80℃冰箱保存备用。

    1.2.1 细胞遗传学G显带

    1.2.1.1 试剂与仪器:主要试剂包括秋水仙素100 μg/ml(Sigma公司)，主要仪器包括TGL-16G台式离心机(上海医用分析仪器厂)、恒温水浴箱(上海市医疗器械一厂)、恒温培养箱(NBS公司)、Leica全自动染色体分析系统(德国Leica公司)。

    1.2.1.2 实验步骤:选取10 mg左右优质绒毛组织放入37℃的无菌加微量肝素0.9%氯化钠中冲洗2～3次，与预温37℃含秋水仙素浓度为0.1～0.4 μg/ml的1%枸橼酸钠5 ml充分混匀，并进行30 min低渗。低渗完成后加入1 ml甲醇：冰醋酸(3∶1)，混匀5 min进行预固定，然后换新鲜固定液置室温固定30 min。弃去固定液，顺管壁加入60%冰醋酸1 ml，1～2 min后，由管底部缓缓加入甲醇3 ml，轻轻混匀，固定5 min时用滴管将绒毛挑出，再离心5 min去上清液。加入2～3滴新鲜固定液，轻轻混匀，以冰片进行滴片，然后立即于60℃烤箱内放置16～24 h或置于37℃下72 h，待其自然冷却后即可进行姬姆萨染色显带；显带完成后进行染色体核型分析：每张片子显微镜下计数20 个中期分裂相，分析2个细胞核型 ......