张英 东丽

    乳腺癌是全球第二大常见的恶性肿瘤。据报道，全球每年约有167万乳腺癌新增患者，占所有癌症患者的11.88%[1]。然而，乳腺癌的发生发展的机制尚未完全阐明。近年来，随着分子生物学的快速发展，基因治疗已成为肿瘤研究的热点，探讨与乳腺癌相关的癌基因或抑癌基因为乳腺癌的临床诊疗提供了新的方向[2]。长链非编码RNA(LncRNA)是一类长度大于200个核苷酸的非编码RNA。研究发现，LncRNA参与调控包括乳腺癌在内的多种恶性肿瘤的发生发展[3,4]。线粒体RNA处理核糖核酸内切酶RNA组分(RMRP)是一种LncRNA，其最早发现于常染色体隐形遗传性疾病软骨发育不全中[5]。研究证实，RMRP在神经母细胞瘤和胃癌等多种恶性肿瘤中表达失调，沉默RMRP抑制神经母细胞瘤细胞的增殖、迁移和侵袭[6,7]。Park等[8]研究发现，RMRP在乳腺癌患者组织中表达上调，但RMRP在乳腺癌方发生发展中的机制并未完全阐明。因此，本研究通过体外细胞实验旨在探讨RMRP对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响，并探讨其作用机制，以期为临床乳腺癌的诊疗提供新的思路。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 正常乳腺细胞HBL-100和4种乳腺癌细胞(SK-BR-3、BT-549、MCF-7和MDA-MB-231)购于美国ATCC；DMEM培养基、胎牛血清、青链霉素双抗溶液购于Hyclone公司；LipofectamineTM 2000相关转染试剂和TRIzol试剂购于Invitrogen公司；MTT细胞增殖检测试剂盒和western blot相关试剂购于碧云天公司；Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒购于北京索莱宝公司；si-RMRP、si-con、miR-con、miR-613 mimics、pcDNA-con、pcDNA-RMRP、anti-miR-613、anti-miR-con、WT-RMRP和MUT-RMRP的构建和测序均由北京华大基因公司提供；Cyclin D1抗体、Bcl-2抗体、Bax抗体均购于Abcam公司；Cyt-c抗体购于深圳子初生物技术有限公司；β-actin抗体购于Santa Cruz公司；HRP标记的二抗购于武汉博士德生物技术有限公司。

    1.2 细胞培养、转染和实验分组 采用含有10%胎牛血清和1%青链霉素双抗的DMEM培养基于37℃、含5% CO2、湿度饱和的细胞培养箱中分别培养HBL-100、SK-BR-3、BT-549、MCF-7和MDA-MB-231细胞 ......