熊颖 郭芳 熊宇 张万里 胡艳艳

    胃癌(gastric carcinoma)是我国发病率最高的恶性肿瘤，主要起源于胃黏膜上皮[1]。胃癌的发病具有区域和性别的差异性，可能与饮食结构及生活习惯、幽门螺旋杆菌感染等因素有关，但其发病的确切机制尚不明确[2]。因此，探索胃癌的发病机制及胃癌细胞凋亡的相关信号通路对临床早期诊断及治疗具有重要的价值。FoxO3蛋白是细胞内重要的自噬调控因子，其活性主要受到沉默信息调节因子1(Sirt1)的去乙酰化调节。Sirt1/FoxO3信号通路与多种病理过程密切相关，如氧化应激、炎性反应、肥胖和肿瘤等[3,4]。但目前尚未见到Sirt1/FoxO3信号通路与胃癌细胞凋亡过程的相关报道。苦参碱是为豆科植物苦参的干燥根、植株、果实经乙醇等有机溶剂提取制成的生物碱，具有抗炎、杀菌、护肝和利尿的药理活性[5-7]。本文对苦参碱促进胃癌细胞SGC7901细胞凋亡的AKT/FoxO3信号通路机制进行研究，为临床新药研发提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 细胞及分组 SGC7901细胞由本实验室保存。将生长状态良好(37℃，5%CO2)的胃癌SGC7901细胞随机分为对照组、Nicotinamide组(20 μmol/L)、苦参碱低剂量组(10 μmol/L)、苦参碱高剂量组(40 μmol/L)。Nicotinamide组细胞给予20 μmol/L的Nicotinamide 4 h，苦参碱低剂量处理组和高剂量组细胞分别给予10 μmol/L和40 μmol/L的苦参碱处理4 h。计算各组细胞的抑制率。抑制率=(对照组OD值-试验组OD值)/对照组OD值×100%。

    1.2 试剂与仪器 兔抗Caspase-3一抗购自Abcam公司(ab13847)；兔抗Bax(MAB846)及兔抗Caspase-9购自R&D公司(MAB8301)；兔抗Bcl-2(sc7382)一抗购自Santa Curz公司；鼠抗Sirt1一抗购自Invitrogen公司(PA5-17232)；鼠抗FoxO3一抗购自Abcam公司(ab58518)；二抗购自武汉博士德生物工程有限公司；显色试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；DAPI及Sirt1抑制剂Nicotinamide购自Sigma Aldrich公司 ......