钟腾猛 黄俊玲 李广志 陆炳站

    肝癌是全球常见的恶性肿瘤之一，发病率逐年上升[1]。据统计，2014年中国肝癌新增病例约36.48万例(男26.89万例，女9.59万例)，死亡病例约31.88万例(男23.35万例，女8.53万例)[2]。肝癌预后差，患者5年内生存率不足15%，已成为全球第二大常见的癌症死亡原因[3]。因此，迫切需要对肝癌发病和转移的机制进行全面阐明。微小RNAs(MicroRNAs，miRNAs/miRs)是一种保守的非编码小RNAs，通过靶向多个分子参与调控基因表达[4]，miRNAs失调是包括癌症在内的多种病理状态的生物标志物。研究表明，miRNAs的异常表达参与多种人类癌症的侵袭和转移过程[5,6]。微小RNA-593-5p(MicroRNA-593-5p，miR-593-5p)在胃癌组织中表达下调，其低表达量与胃癌患者临床病理特征密切相关，miR-593-5p过表达可明显抑制胃癌细胞增殖[7]。miR-593通过调控PLK1基因表达抑制结肠癌细胞增殖，并发挥抑癌基因作用[8]。在人胃癌MGC-803细胞中上调miR-593-5p表达会抑制裸鼠移植瘤模型胃癌细胞生长，侵袭、转移[9]。本研究以肝癌细胞为对象，利用qPCR、MTT及Transwell小室法等技术检测miR-593-5p在肝癌细胞中的表达及其对肝癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并进一步探索其可能的分子机制，为肝癌的临床诊治提供潜在的生物标志物和治疗靶点。

    1 材料与方法

    1.1 主要材料与仪器 人肝癌细胞系Hep3B、HepG2、SMMC-7721、Huh7和正常人肝细胞HL7702购自美国ATCC细胞库，DMEM培养基、胎牛血清购自美国GIBCO公司，胰酶、MTT、二甲基亚砜(Dimethyl sulphoxide，DMSO)购自美国Sigma公司，TRIzol、Lipofectamine 2000购自Invitrogen公司，miR-593-5p、anti-miR-593-5p、pcDNA-PHF10购自广州锐博生物有限公司，RIPA裂解液、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gelelectrophoresis，SDS-PAGE)凝胶配制试剂盒购自碧云天生物技术研究所，甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、磷脂酰肌醇-3激酶(Phospoinositide 3-kinase ......