孙绪举 干飞 胡娟 张继东

    肝癌是世界上第六大常见癌症，也是全球癌症死亡的第四大原因，据统计，每年约有841 000例新增病例和782 000例死亡病例，其中，全世界大多数地区的男性发病率和死亡率均高出2～3倍，使肝癌居于男性癌症相关死亡原因的第二位[1]。肝癌预后差，只有极少数的患者通过手术切除或肝移植治愈[2]。超过80%的患者因疾病晚期或肝功能不良而无法接受有效治疗[3]。因此，迫切需要寻找有效的药物或治疗方法来提高患者预后。伊立替康(Irinotecan，CPT-11)是临床用于治疗不可切除/复发性结直肠癌的关键抗癌药物[4]。既往研究发现，聚乙二醇微球负载伊立替康与动脉导向栓塞治疗在转移性肝癌中是有效的，并且导致轻微的毒性和良好的生活质量[5]，伊立替康联合吉非替尼能够显著抑制肝癌细胞增殖和克隆形成能力，并诱导细胞凋亡，对肝癌起着抑制作用[6,7]。但伊立替康对肝癌生物行为影响的具体机制尚不清楚。因此，本研究以肝癌细胞HepG2为对象，考察伊立替康对细胞增殖、迁移和侵袭的影响，并结合长链非编码RNA SNHG1(Long noncoding RNA SNHG1，SNHG1)和微小RNA-195(microRNA-195，miR-195)，旨在探索其可能的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂 肝癌细胞HepG2购自美国ATCC细胞库，伊立替康购自华中科技大学医院，RPMI-1640培养基、胎牛血清购自美国Gibco公司，青链霉素、胰蛋白酶、MTT、RIPA裂解液购自美国Sigma公司，si- SNHG1、pcDNA3.1- SNHG1、miR-195、anti-miR-195购自武汉淼灵生物科技有限公司，Lipofectamine 2000、TRIzol购自美国Invitrogen公司， Transwell小室购自美国Corning公司，Matrigel基质胶购自美国BD公司，细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2，MMP-2)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)蛋白抗体购自美国Cellular Signaling Technology公司，辣根过氧化物酶标记二抗购自北京中杉金桥生物技术有限公司，逆转录试剂盒、qPCR试剂盒购自美国ThermoFisher公司。

    1.2 细胞培养与实验处理 肝癌细胞HepG2复苏后 ......