于芳 马香书 霍丽静 赵培 马倩 于悦卿 路永刚 帖彦清

    心血管疾病由于发病人数多并且逐渐年轻化，危险因素广泛，病程时间长,并发症多，缩短人类的寿命和降低人民生活质量。动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是导致心血管疾病的主要病理学基础[1]。巨噬细胞摄取脂蛋白，在细胞内聚积脂质，形成泡沫细胞，释放不同的酶、催化剂、抑制剂和生物活性介质，在动脉粥样硬化的发生发展过程中具有重要作用[2]。在众多细胞胞内信号通路的调节中，蛋白酪氨酸磷酸化与去磷酸化是其中的一种重要方式，其中SHP2(Src homology2 domain-containg protein tyrosine phosphatase 2，SHP2)是蛋白酪氨酸磷酸酶的重要组成部分[3]。在树突细胞及巨噬细胞中，激活dectin-1、dectin-2/3和Mincle受体后，SHP2能被高度磷酸化。在巨噬细胞敲除SHP2基因后，dectin诱导的Syk磷酸化程度明显减弱，进一步与之对应的是它们所诱导的细胞因子和趋化因子的表达下调[4]。已有研究显示，酪氨酸家族在肝脏，肌肉和脂肪组织中参与血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)的增殖与迁移，SHP2在VSMC中大量增殖[5]。PHPS1作为SHP2的渗透性抑制剂，能够抑制SHP2的磷酸化水平和SHP2介导的细胞功能和多种人肿瘤的细胞系生长[6]。PHPS1是治疗SHP2相关肿瘤及其他疾病的新的突破点，PHPS1的亚硫酸部分可能形成七个格子的氢键连接在SHP2-PTP的环状结构上，破坏SHP2的结构从而抑制SHP2的磷酸化水平[1]。使用SHP2抑制剂PHPS1对于动脉粥样硬化斑块的影响笔者未知，PHPS1能否减少泡沫细胞的产生？本实验通过建立ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化动物模型，探讨SHP2抑制剂PHPS1在动脉粥样硬化中的发展及其作用机制。通过体外培养RAW246.7，观察使用了PHPS1后，SHP2的表达水平与巨噬细胞的增殖情况。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂与仪器 p-Shp2抗体(货号：ab62322)，p-Syk抗体(货号：ab192587)，CD36抗体(货号：133625)，显微镜显微镜(型号：ECLIPSE E100)购于尼康仪器(上海)有限公司；PBS缓冲液购自BI生物公司；组织包埋机(型号：EG11508)、石蜡切片机(型号：RM2135)均购自Leica公司；Western Blot电泳槽(型号：DYCZ-24DN型)、转移电泳仪(型号：DYY-7B型)及恒温循环器(型号：WD-9412A型)均购自北京六一生物科技有限公司；制冰机(型号：SIM-F124型)购自日本5ANY0有限公司；实时荧光定量PCR仪器；RAW246.7 ......