努尔阿米娜·依明尼亚孜 帕力旦·艾沙 阿依姆妮萨·阿卜杜热合曼

    急性淋巴细胞白血病属于血液系统性疾病，其主要特征是细胞恶性增殖、细胞凋亡受抑[1]。因而如何抑制白血病细胞增殖及促进细胞凋亡成为目前研究重点问题。研究表明奇果菌素(grifolin，Gri)可通过诱导人骨肉瘤细胞凋亡从而抑制骨肉瘤细胞生长[2]。奇果菌素还可抑制胃癌细胞增殖及侵袭，诱导细胞凋亡[3]。但奇果菌素对白血病细胞增殖、凋亡的影响尚未可知。研究表明微小RNA-646(microRNA-646，miR-646)在结直肠癌、胃癌、骨肉瘤组织及细胞中下调表达，并可抑制细胞增殖及迁移[4-6]。但miR-646对白血病细胞增殖、凋亡的影响尚未可知。TargetScan预测显示解聚素-金属蛋白酶17(a disintegrin and metalloprotease 17，ADAM17)可能是miR-646的靶基因，研究表明ADAM17在食管鳞状细胞癌组织和细胞中呈高表达，其高表达量与细胞侵袭及转移有关[7]。沉默ADAM17表达可抑制人甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭[8]。但笔者发现miR-646与ADAM17的靶向关系，以及奇果菌素是否通过调控miR-646/ADAM17通路影响白血病细胞的增殖和凋亡尚未可知。本研究以白血病K562细胞为研究对象，深入探讨奇果菌素对白血病细胞的增殖和凋亡影响及其对miR-646/ADAM17通路的调控作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 奇果菌素购自上海赫澎生物科技有限公司；白血病细胞K562购自美国ATCC细胞库。RPMI 1640培养基购自上海源叶生物科技有限公司；甲基噻唑基四唑(methylthiazolyl tetrazolium，MTT)细胞增殖试剂盒购自上海齐一生物科技有限公司；细胞凋亡试剂盒购自北京庄盟国际生物基因科技有限公司；Trziol试剂、反转录与实时荧光定量PCR试剂盒与聚氰基丙烯酸正丁酯(bicinchonininc acid，BCA)蛋白浓度测定试剂盒均购自美国Thermo Fisher公司；磷酸盐缓冲液(phosphate buffered saline，PBS)、蛋白提取试剂盒购自上海联迈生物工程有限公司；miR-646 模拟物(mimics)、阴性对照(miR-NC)、miR-646抑制剂(anti-miR-646)、anti-miR-NC、ADAM17小干扰RNA(si-ADAM17)、乱序无意义阴性对照序列(si-NC)购自上海吉玛基因；Lipofectamine2000购自上海北诺生物科技有限公司；兔抗人细胞周期蛋白1(CyclinD1)、P21一抗购自美国Cell Signaling Technology公司；兔抗人ADAM17、 B淋巴细胞瘤-2 (B-cell lymphoma-2 ......