李二龙 张皓义 韩成龙 谢林伸

    人黑色素瘤是一种最常见和最具侵袭性的皮肤肿瘤。近年来，虽然黑色素瘤的综合治疗技术不断改善，但黑色素瘤的发病率仍呈逐年上升趋势，每年约有7.5万新增病例，并且黑色素瘤患者预后较差，转移性黑色素瘤患者5年生存率低于20%[1,2]。因此，开发新的黑色素瘤防治策略具有重要意义。miR-509-5p是一种与肿瘤相关的miRNA，研究发现，在非小细胞肺癌[3]、乳腺癌[4]和肾癌[5]等多种癌症中miR-509-5p表达下调，并发挥抑癌基因作用。同时，有报道称miR-509-5p参与调控黑色素瘤的EMT进程[6]。ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)是参与葡萄糖代谢相关的脂质生物发生的重要酶，研究发现，ACLY在胃癌、胶质母细胞瘤、结肠直肠癌和乳腺癌等肿瘤细胞中表达上调，miR-133b可通过抑制ACLY表达和活化抑制胃癌细胞的增殖和侵袭[7,8]。生物信息软件在线预测显示，ACLY是miR-509-5p的潜在靶基因，但miR-509-5p是否可靶向ACLY调控人黑色素瘤细胞增殖和凋亡尚未可知。因此，本研究通过体外细胞实验旨在揭示miR-509-5p靶向调控ACLY表达对人黑色素瘤细胞增殖和凋亡的影响，以期为miR-509-5p和ACLY作为人黑色素瘤的治疗靶点提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人黑色素瘤细胞系A375和SK-MEL-2购于ATCC，正常人表皮黑色素细胞系HEMn-LP、M-254培养基、DMEM培养基、胎牛血清、青链霉素双抗、LipofectamineTM 2000和TRIzol试剂均购于Invitrogen公司；RIPA裂解液和 Western相关试剂均购于北京索莱宝公司；PCR引物、miR-509-5p mimics、miR-NC、pcDNA-ACLY、pcDNA、anti-miR-NC、anti-miR-509-5p、ACLY-WT和ACLY-MUT的构建和测序由北京华大基因提供；ACLY抗体购于Abnova公司；GAPDH、CyclinD1、CDK2、CDK1、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3抗体购于Abcam公司。

    1.2 细胞培养、转染和分组 用M-254培养基培养HEMn-LP细胞，用DMEM培养基培养SK-MEL-2、UACC903和A375细胞，所有培养瓶中添加10%的胎牛血清 ......