李金秀 夏天 康寿磊

    肺泡上皮细胞是肺脏结构和功能的基础，肺泡上皮细胞凋亡是急性肺损伤(acute lung injury，ALI)的一个重要病理变化特征，ALI时肺组织严重破坏，呼吸功能严重受损[1]。炎性反应在ALI的发生发展中有重要地位[2]。从分子生物学水平出发，在细胞层面通过探讨特异性靶点可作为干预治疗ALI的潜在手段，而研究发现部分miRNA在肺损伤和修复过程中异常表达，并通过影响其靶基因的表达而调控炎性反应，与ALI的进展密切相关[3]。miR-32-5p参与结核分枝杆菌中的炎性反应，其过表达减弱了炎性细胞因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和白介素-6(interleukin-6，IL-6)的积累[4]。核因子白介素-3(nuclear factor interleukin-3，NFIL3)是一种关键的转录抑制因子，对于NK细胞和先天淋巴细胞的发育至关重要[5,6]。研究发现NFIL3可通过靶向胰岛素样生长因子2受体抑制缺氧诱导的凋亡细胞死亡[7]。然而miR-32-5p和NFIL3对脂多糖诱导的肺上皮细胞凋亡和炎性反应的影响及机制是否与miR-32-5p调控NFIL3相关还尚未可知，本文研究miR-32-5p是否通过调控NFIL3影响脂多糖诱导的肺上皮细胞凋亡和炎性反应，报告如下。

    1 材料与方法

    1.1 材料 肺上皮细胞A549购自中国科学院上海细胞库；胎牛血清、DMEM培养基、胰蛋白酶、二甲基亚砜(DMSO)、BCA试剂盒、PBS缓冲液购自美国Sigma公司；Lipofectamine TM 2000转染试剂盒购自美国Invitrogen公司；Trizol试剂、反转录试剂盒、荧光定量试剂盒购自日本TaKaRa公司；膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)和碘化丙锭(PI)试剂盒、双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自北京Solarbio公司；酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒购自上海联科生物技术有限公司；RIPA蛋白裂解液、PVDF膜、SDS-PAGE试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司；抗体均购自上海煊翎生物科技有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养与分组:将肺上皮细胞A549在37℃、含10%胎牛血清的DMEM完全培养液中培养 ......