李静 刘琴 柯锦

    人类黑色素瘤是皮肤肿瘤中常见的恶性肿瘤，据统计，2018年，全球皮肤黑色素瘤新增病例为287 723例，死亡病例达60 712例[1]。黑色素瘤具有高度侵袭性，近1/3的黑色素瘤患者将经历疾病复发，大多数复发最终发展为转移性疾病[2]。然而，黑色素瘤的生长和转移机制仍不清楚。因此，需要进一步的研究来阐明黑色素瘤发生和发展的分子机制，以开发有希望的治疗方法。微小RNA(microRNA，miRNA/miR)是一类内源性非编码RNA，在组织和细胞中特异性表达。迄今为止，已经确定了多个在黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭中发挥关键作用的miRNA，以及参与细胞凋亡、免疫应答、上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)的miRNA[3,4]，如miR-150-5p[5]、miR-27a[6]、miR-1297[7]、miR-22[8]，miRNA可能是黑色素瘤的有效治疗靶点。既往研究表明，微小RNA-582-5p(microRNA-582-5p，miR-582-5p)在人子宫内膜癌组织中的表达显著降低，miR-582-5p的上调抑制子宫内膜癌细胞增殖，促进细胞凋亡[9]。miR-582-5p通过靶向调控丝氨酸/苏氨酸激酶3(serine/threonine kinase 3，AKT3)抑制胃癌细胞增殖，诱导其凋亡[10]。上调miR-582-5p抑制人结肠癌细胞增殖、细胞周期进展和侵袭[11]。但miR-582-5p在黑色素瘤细胞中的生物学功能尚未明确。MiR-29a通过调节肿瘤抑制因子细胞因子信号转导抑制因子1(suppressor of cytokine signaling 1，SOCS1)的甲基化来抑制宫颈癌的侵袭和转移[12]，SOCS1基因沉默抑制人恶性黑色素瘤细胞和人胰腺癌细胞增殖[13,14]。基于此，本研究在体外培养黑色素瘤细胞，观察miR-582-5p对细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡、EMT的影响及对SOCS1的靶向关系，以探索其作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人黑色素瘤细胞株(A375、G361、WM35、M14)购自美国典型培养物保藏中心(American Type Culture Collection,ATCC)，人类皮肤黑色素细胞(NHEM)、Melanocyte Growth Medium培养基购自瑞士LONZA公司，RPMI-1640培养基(Roswell Park Memorial Institute)购自美国Gibco公司 ......