钟勇 贺珊珊 陈玉梅

    脓毒症指烧伤、感染等引发的一种全身性炎性反应，严重时还可发展为急性呼吸窘迫综合征、感染性休克等造成患者死亡[1,2]。脓毒症发生时炎性因子及炎性介质的大量释放导致促炎因子、抗炎因子失衡从而造成机体免疫功能损伤[3]。因而如何降低炎性反应成为研究重点。研究表明微小RNA(microRNA，miRNA)在炎性反应中发挥重要作用，并可作为诊断脓毒症的潜在生物标志物[4]。研究表明微小RNA-365(microRNA-365，miR-365)表达降低与脓毒症患者炎性因子释放量增加有关[5]。但miR-365在脓毒症发生过程中的作用机制尚未完全阐明。starBase预测显示白细胞介素-1受体相关激酶1(interleukin-1 receptor-associated kinase 1，IRAK1)可能是miR-365的靶基因，研究表明脂多糖诱导的人胚肺成纤维细胞中IRAK1高表达并可促进炎性反应造成细胞损伤[6]。但miR-365是否通过调控IRAK1的表达从而参与脓毒症发生过程尚未可知。本研究采用体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)[7]，观察miR-365对脂多糖(lipopolysacharide，LPS)诱导的HUVECs炎性因子及细胞增殖、细胞凋亡的调节作用，并分析其对IRAK1的调控作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人脐静脉内皮细胞(HUVECs)购自美国ATCC公司；LPS购自美国eBioscience公司；EGM-2培养基购自北京毕特博生物技术有限责任公司；DMEM培养基、胰蛋白酶、胎牛血清均购自美国Gibco公司；Lipofectamine2000购自美国Invitrogen公司；miR-365模拟物(mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-con)、miR-365特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-365)及阴性对照(anti-miR-con)均购自上海吉玛制药技术有限公司；肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)、白细胞介素6(interleukin-6，IL-6)酶联免疫吸附试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司；甲基噻唑基四唑(methylthiazolyl tetrazolium，MTT)购自北京百奥莱博科技有限公司；膜联蛋白V(annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(propidium iodide ......