王捷 张亚楠 张瑜 高旭辉

    食管癌(esophageal cancer)是我国最常见的消化道恶性肿瘤之一，其为中国癌症死亡的第四大原因[1]。尽管由于诊断、手术和放化疗技术的不断进展，但其化学抗性和转移倾向仍是影响食管癌预后的主要原因[2]。随着对癌症生物学的进一步研究，越来越多的研究人员开始探索新的治疗方法，miRNA、siRNA或核酶的寡核苷酸疗法的特异性和安全性得到关注。miRNA是长度在18～24个核苷酸之间的短链非编码内源性微小RNA，其参与人类多种疾病的发生发展[3]。miR-186-5p在多种癌症中均下调，发挥抑制癌症进一步恶化的作用[4]，但是其在食管癌中的作用及机制尚未十分清楚。神经营养因子受体B(TrkB-T1)是一种145 kDa受体酪氨酸激酶，是人类癌症中肿瘤发生发展的关键调节因子[5]。失调的TrkB-T1在多种癌症的进程中均具有重要作用[6,7]。本研究以食管癌细胞ECA109为研究对象，检测其中miR-186-5p、TrkB-T1的表达，观察过表达miR-186-5p、敲减TrkB-T1、过表达TrkB-T1对食管癌细胞迁移侵袭及EMT的影响，揭示其机制与miR-186-5p靶向TrkB-T1相关，为食管癌的治疗提供新靶标。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人正常食管上皮细胞HEEC、食管癌细胞ECA109、TE1、KYSE150均购自ATCC；DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶均购自美国GIBCO公司；LipofectamineTM2000、BCA蛋白定量试剂盒、逆转录试剂盒购自大连TaKaRa；Matrigel基质胶、Transwell小室购自美国Coming公司；PVDF膜购自德国罗氏诊断有限公司；SDS-PAGE 试剂盒、ECL发光液和RIPA蛋白裂解液均购自碧云天生物技术公司；双荧光素酶报告基因检测试剂盒购自美国Promega公司。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养:将人正常食管上皮细胞HEEC、食管癌细胞ECA109、TE1、KYSE150，用含10%胎牛血清的DMEM培养基，置于37℃、5%CO2的恒温培养箱中常规培养，待细胞生长至融合度75%左右，用胰蛋白酶消化，按照1∶3的比例更换培养基 ......