荣海燕 蒋静 时瑛 薛黎

    近年来，热休克蛋白(heat shock protein，HSP)在病毒复制领域的相关研究成为一个热点内容。HSP是一类普遍存在于真核和原核生物中的由应激诱导的保护细胞免受各种环境损害的高度保守蛋白质，根据其分子量的大小可分为6个家族：HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、小分子HSP、泛素[1]。其中分子量为70 kD 的热休克蛋白HSP70 在原核和真核生物体内可通过参与一些重要蛋白质的转位、折叠和装配，进一步影响蛋白质功能的完整性，被称为主要热休克蛋白[2,3]。研究表明，HSP70 是细胞内分子伴侣和折叠蛋白系统的核心“组件”，在一些病毒的复制起始、转录翻译和病毒粒子的装配过程中都有HSP70的参与，其作用机制可能是通过其“分子伴侣”特性，与病毒自身的某些重要蛋白发生结合，影响这些蛋白的空间构象，从而参与病毒生命周期的各个阶段，如转录、翻译、复制及组装[4,5]。Notch 信号通路是一种进化保守的信号通路，从果蝇到哺乳动物等许多生命体中普遍存在，在细胞的发育、分化、增殖、凋亡和调节组织内稳态及肿瘤形成中具有重要的作用。在哺乳动物中存在4 种Notch 受体(Notch1～4)和5 种Notch 配体，Notch 信号通路参与了多种疾病(包括恶性肿瘤)的发生、发展过程[6,7]，其中，Notch1 信号通路是目前研究最多的信号通路之一。近年来Notch1 信号通路与肝癌的相关性研究备受关注。在HBV与Notch1 信号通路交互作用方面，研究发现乙型肝炎病毒X 蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)可能是通过NF-κB 和Notch1 途径激活白介素-7受体(IL-7R)表达，进而促进乙肝病毒相关肝癌细胞的增殖和迁移[8]。由于病毒本身的复制能力有限，在很大程度上需要宿主蛋白来帮助其完成复制周期，为研究宿主蛋白HSP70 与HBV 复制的关系，本研究通过在HepG2 2.15 HBV复制细胞系中过表达HSP70来探讨HSP70对HBV表达及Notch1信号通路的影响，旨在为HBV相关肝细胞癌的基础研究、新药开发和临床诊疗等提供理论依据和参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料 HepG2 2.15人肝癌细胞株来源于丰晖生物；Lipofectamine 3000 Transfection Reagent(Invitrogen)；TransDetect Cell Counting Kit (CCK) (全式金生物)；pENTER空载质粒(Vigene)；Anti-HSP70 Antibody、Anti-HES1 Antibody(博士德)；Anti-Notch1抗体(abcam)；HBV核酸测定试剂盒(达安基因)；人乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、人乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)(华美生物)；Real Time PCR instrument(ABI) ......