翟佳佳 康平

    秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans，C.elegans)结构简单、生长周期短、基因与人类基因具有高度同源性、易培养，是研究遗传、基因组和分子网络的重要模式。蛋白磷酸酶2A(protein phosphatase 2A，PP2A)属于丝/苏氨酸磷酸酶，在调节细胞关键功能，如细胞周期、发育、代谢和凋亡中发挥重要作用。mbk-2是秀丽隐杆线虫双特异性Yak-1相关激酶家族中的两种丝氨酸/苏氨酸激酶之一。mbk-2在早期胚胎发育，特别是在单细胞胚胎的多个微管依赖过程中起重要作用，包括原核迁移、纺锤体定位、微管稳定性和染色体分离[1]。大规模线虫RNAi筛选发现，增强子pptr-1、pptr-2对mbk-2有调节作用。pptr-1和pptr-2可编码PP2A的调节亚单位，对调节PP2A功能发挥重要作用。本研究采用秀丽隐杆线虫mbk-2突变体观察PP2A调节亚单位pptr-1和pptr-2对mbk-2的调控作用，为进一步研究mbk-2在胚胎发育中的作用及调控机制提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 线虫株系与菌株 野生型线虫N2、mbk-2基因敲除型线虫株系、大肠埃希菌OP50 购自美国秀丽线虫遗传中心(Caenorhabditis Genetics Center)。

    1.2 主要仪器及试剂 氨苄青霉素(上海BBI，A610028);羧苄青霉素(美国Sigma，A6140);L4440质粒(美国Addgene)。体式解剖显微镜(厦门Motic)；低温高速离心机(德国eppendorf)；激光共聚焦成像系统(德国Leica)。

    1.3 实验方法

    1.3.1 线虫生长培养:线虫培养采用NGM培养基，称取NaCl 3 g，琼脂20 g，蛋白胨2.5 g，溶于975 ml双蒸水，高压灭菌。冷却后，加入1 mol/L CaCl21 ml，5 mg/ml胆固醇1 ml，1 mol/L MgSO41 ml和1 mol/L KPO4缓冲液25 ml，混匀后导入细菌培养皿中。室温放置2 d后，铺上OP 50菌，室温放置2 d后即可培养线虫。

    1.3.2 线虫同步化:将线虫常规培养在NGM培养基上，20℃生化培养箱中生长繁殖 ......