潘虹 余小霞 普艳红 袁瑞仙

    乳腺癌是一种常见的女性恶性肿瘤，具有很高的发病率，在我国，乳腺癌在女性恶性肿瘤中排第三位，严重危害着女性的身体健康[1]。临床上虽然可通过手术治疗，但是由于乳腺癌本身的发病原因多样，涉及到的分子机制复杂，导致乳腺癌患者的长期生存率以及治疗预后并不理想[2]。相关研究表明非编码小分子RNA(microRNA，miRNA)是一类由19～22个核苷酸组成的小分子RNA，其可通过调节相关基因发挥促癌或者抑癌作用，与肿瘤密切相关，在细胞增殖、凋亡以及侵袭等过程中至关重要[3,4]。其中miRNA-135a是定位于 3号染色体的miRNA-135 家族的重要组成成员，相关研究表明miRNA-135a在脑胶质瘤、结肠癌、乳腺癌等恶性肿瘤中发挥重要的调控作用[5,6]。此外，同源框基因 HOXA10是胚胎发育过程中的重要转录因子，调节癌细胞的增生与分化。本研究将以MCF-7乳腺癌细胞作为模型细胞，探讨miRNA-135a对于乳腺癌细胞HOXA10表达的调控以及该作用对于乳腺癌细胞生物学特性的影响。

    1 材料与方法

    1.1 组织标本 收集2017年5月至2018年3月于我院就诊的58例乳腺癌患者癌组织及距离癌组织>2 cm 处的正常组织，经组织病理学检测证实为乳腺癌。所有入选患者在术前均未进行放化疗和其他治疗，且临床病理资料完整。58例乳腺癌患者，年龄25～65岁，平均年龄(40.73±12.37)岁；TNM分期：Ⅰ期患者20例，Ⅱ期患者12例，Ⅲ期患者18例，Ⅳ期患者8例；肿瘤直径

    表1 引物序列

    1.4 实验细胞培养 采用RPMI1640完全培养基(含10%胎牛血清、1%青霉素-链霉素混合抗生素溶液)在37℃、5%的CO2恒温细胞培养箱中培养乳腺癌细胞MCF-7。每3天对细胞进行传代1次。取处于对数生长期且生长状态良好的细胞消化。构建miRNA-135a的慢病毒表达质粒，取 3 μg miRNA-135a的慢病毒表达质粒以及慢病毒表达空质粒分别和 8 μg Packaging Mix加入RPMI1640培养基中，轻轻混匀后加入 20 μl的Endo FectinTM-Lenti 转染试剂，室温孵育 30 min。将混合物缓慢加入到MCF-乳腺癌细胞，继续培养48 h后收集细胞用于后续实验。

    1.5 CCK-8及平板克隆实验检测细胞增殖能力 将上述转染后细胞以及未转染细胞分别按每孔5×103个/孔铺于12孔板，每组4个孔分成三组，分为空白对照组(未进行转染)、空载体组(转染空载体)、miRNA-135a组(转染miRNA-135a) ......