闫晓楠 杜辉 左宏玲 张娜 王惠兰 徐春琳

    卵巢癌为女性生殖器官三大恶性肿瘤之一，严重威胁全球女性的生命健康。其发病隐匿，早期阶段无特异症状，确诊时通常已是Ⅲ～Ⅳ期，该疾病全球范围内的5年生存率低于30%[1]。影响患者生存率的主要因素包括肿瘤对周围组织的浸润以及远处器官的转移。因而，卵巢癌的侵袭转移机制仍为当今研究热点。已有研究表明，恶性肿瘤发生转移的时，上皮细胞间质转化(EMT)发挥了关键性的作用[2,3]。EMT变化主要为E钙粘蛋白(即E-cadherin)表达下调，而N钙粘蛋白(即N-cadherin)表达上调[4,5]。碱性螺旋-环-螺旋转录因子(Twist)蛋白是一种高度保守的转录因子，活化后的Twist可上调N-cadherin蛋白并下调E-cadherin蛋白的表达，促进EMT的发生发展[5]。多种因子在肿瘤微环境中可促进EMT的发生，其中一个关键的诱导因子为转化生长因子-β1(TGF-β1)[6]，可显著地影响女性卵巢疾病的发展过程，值得高度关注[7]。当TGF-β1诱导肿瘤细胞发生EMT时，涉及多种信号传导通路，位于下游的PI3K/Akt信号通路(非Smad依赖性的)表现突出[8]。因而，本研究以EMT为切入点，探讨SKOV-3细胞EMT发生时受TGF-β1影响的相关规律，进而对PI3K/Akt信号通路的作用进行分析，以期为临床提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料 采用北大人民医院提供的SKOV-3细胞(人卵巢浆液性囊腺癌细胞)，通过含胎牛血清(10%)的RPMI-1640培养基进行培养。其他试剂包括Sigma生产的MTT，Cambridge公司生产的Transwell小室，以及贝博公司生产的蛋白裂解液，Peprotech生产的TGF-β1，SantaCruz生物技术公司所生产的Twist、N-cadherin和E-cadherin等三类单克隆抗体，p-Akt(Thr308)多克隆抗体等。

    1.2 实验方法

    1.2.1 细胞培养及分组在无酚红RPMI1640培养基中接种SKOV-3细胞(链霉素100 U/ml、青霉素100 U/ml、胎牛血清10%)，在温度为37℃且含有5%浓度CO2的培养箱中进行培养。实验细胞状态良好，处于对数生长阶段。MTT法检测各种TGF-β1浓度条件下(1、2、5、10 ng/ml)分别作用24、48 h后SKOV-3细胞的增殖情况 ......