李红 杨昊 鞠海涛

    脑胶质瘤是起源于大脑和中枢神经系统胶质细胞或前体细胞的最常见的原发性恶性肿瘤，包括星形细胞瘤和少突胶质细胞瘤等病理类型[1]。目前手术联合放、化疗是脑胶质瘤的主要治疗手段[2]，然而高度侵袭性胶质瘤患者中位生存期仅为12～14个月，放射抵抗是导致其预后不良的重要原因[3]。因此，探讨脑胶质瘤放射抵抗的分子机制，提高胶质瘤细胞的放射敏感性迫在眉睫。长链非编码RNA(Long non-coding rna，lncRNA)是长度超过200个核苷酸的非蛋白编码转录本，通过与基因组DNA、微小RNA(microRNA，miRNA)、mRNA和蛋白相互作用，发挥其生理和病理功能[3]。大量研究表明除参与正常发育外，lncRNA与肿瘤发生的密切相关，其可作为癌基因或抑癌基因，参与肿瘤发生、转移、放疗耐药和预后[4,5]。研究显示，LINC00963在黑色素瘤[6]、肝癌[7]等多种恶性肿瘤中表达上调发挥癌基因作用，沉默LINC00963还可提高乳腺癌细胞的放射敏感性[8]。miRNA是一种抑癌基因，miR-144-5p过表达可增强非小细胞肺癌细胞的放射敏感性[9]。生物信息学分析显示LINC00963和miR-144-5p之间可能存在相互作用，于是本研究推测LINC00963可能通过靶向miR-144-5p参与调控脑胶质瘤细胞凋亡及放射敏感性。因此，本研究通过体外细胞实验旨在探讨LINC009631和miR-144-5p对脑胶质瘤细胞放射射敏感性的影响及其分子机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料 收集2016年1月至2018年1月于内蒙古肿瘤医院和内蒙古医科大学附属医院接受神经外科手术切除的胶质瘤组织标本20例，其中男14例，平均年龄47.2岁；女6例，平均年龄45.5岁。应用冰冻组织切片法和免疫组化方法病理科对采集的胶质瘤样本按照WHO 2007年分级标准鉴定，其中Ⅰ～Ⅱ级8例，Ⅲ～Ⅳ级12例。收集同期于我院因颅脑手术切除的正常人脑组织20例。脑胶质瘤U251细胞购自中国科学院上海细胞研究所；DMEM培养基和胎牛血清购自美国Hyclone公司；Trizol试剂、RIPA裂解液、LipofectamineTM 2000购自美国Invitrogen公司；TLINC00963小干扰RNA阴性对照(si-NC)、TLINC00963小干扰RNA(si-TLINC00963)、miR-144-5p模拟物阴性对照(miR-NC)、miR-144-5p模拟物(miR-144-5p mimics)、miR-144-5p抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、miR-144-5p抑制物(anti-miR-144-5p)、空载体(pcDNA)、LINC00963过表达质粒(pcDNA-LINC00963)购自上海吉玛制药有限公司；逆转录试剂盒、SYBR green qPCR Super Mix购于大连Takara公司；兔抗B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)和活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(cleaved-caspase 3)以及GAPDH抗体购自美国Abcam公司 ......