邓永宜 何永桥 陈洁

    动脉粥样硬化是临床常见疾病，也是心脑血管病的主要病理基础，其发病机制尚未完全清楚，且临床缺乏特异性的治疗药物[1]。血管内皮细胞是血管壁的主要屏障，其损伤和功能障碍是动脉粥样硬化发生的始动环节[2]。氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)可损伤内皮细胞，促进动脉粥样硬化的发生发展[3]。探讨影响ox-LDL诱导的内细细胞损伤的分子机制对于动脉粥样硬化治疗靶点的寻找具有重要意义。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类小分子单链非编码RNA，可与其靶基因的3’端非翻译区(3’untranslated region，3’UTR)靶向结合，抑制靶mRNA翻译或降解靶mRNA，调控靶基因的表达，在细胞增殖、凋亡、氧化应激和炎症等一系列生命活动中发挥重要作用[4，5]。研究显示，miR-338-3p在卵巢癌、非小细胞肺癌、肝细胞癌等肿瘤细胞中表达下调，过表达miR-338-3p可抑制肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭等恶性生物学行为，是肿瘤治疗的潜在靶点[6-8]。但miR-338-3p对内皮细胞损伤的影响及机制尚不明确。Target scan生物信息学软件预测显示，F框/WD-40域蛋白7(F-box and WD-40 domain protein 7，FBXW7)是miR-338-3p的靶基因。FBXW7是SCF类泛素连接酶E3复合体中特异性识别底物的关键因子，参与调节细胞生长和凋亡等生命过程[9]。有报道FBXW7是体外内皮屏障功能的新型调节剂，其表达缺失通过间接调节Ras同源物基因家族成员B的活性，导致内皮细胞收缩力增加和内皮屏障破坏[10]。目前，miR-338-3p能否通过调节FBXW7参与内皮细胞损伤还未知。因此，本研究采用ox-LDL诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)，探讨miR-338-3p靶向调控FBXW7对HUVECs细胞氧化应激和凋亡的影响及其机制，以期为动脉粥样硬化的靶向分子治疗提供一定的实验依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与实验试剂 HUVECs细胞(中国科学院上海细胞库)，胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、高糖DMEM培养基、四甲基噻唑蓝(methylthiazoletrazolium，MTT)、胰蛋白酶、二喹啉甲酸(bicinchoninicacid，BCA)蛋白检测试剂盒、膜联蛋白V(Annexin V)-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(Propidium Iodide ......