雷肖蠢 张海良 丁鹏

    脓毒症是临床常见的一种全身性炎症疾病之一，严重时可引发心脏等多器官功能障碍，但关于其发病机制尚未阐明[1]。既往研究显示炎性反应与心肌细胞过度凋亡是促使心肌损伤的重要原因[2-4]。研究表明脂多糖(lipopolysacharide，LPS)可与心肌细胞表面相关受体结合而促进炎性反应的发生从而造成心肌细胞功能障碍，其可用于建立体外心肌细胞损伤模型[5]。因而深入探究心肌细胞损伤机制有助于改善患者预后。长链非编码RNA MFI2-AS1(Long non-coding RNA MFI2-AS1，LncRNA MFI2-AS1)在LPS诱导的软骨细胞中呈高表达，敲低MFI2-AS1表达可抑制骨关节炎进展[6]。生物信息学分析显示微小RNA-331-3p(microRNA-331-3p，miR-331-3p)可能是MFI2-AS1的靶基因，研究表明miR-331-3p在胰腺癌发生过程中发挥癌基因作用[7]。但MFI2-AS1是否靶向miR-331-3p参与心肌细胞损伤过程尚未可知。本研究通过LPS诱导心肌细胞构建细胞损伤模型，观察细胞中MFI2-AS1与miR-331-3p的表达水平，分析其对细胞增殖及凋亡的影响，旨在为揭示心肌损伤的分子机制奠定理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂 大鼠心肌细胞H9c2购自美国ATCC细胞库。杜氏改良培养基(DMEM)购自美国Gibco公司；胎牛血清(fatal bovine serun，FBS)购自上海玉博生物科技有限公司；LPS购自上海睿安生物科技有限公司；Trizol试剂与pcDNA3.1购自美国Invitrogen公司；Lipofectamine2000购自美国Thermo Fisher Scientific公司；反转录试剂盒与荧光定量PCR试剂盒购自日本TaKaRa公司；MFI2-AS1小干扰RNA(si-MFI2-AS1)、乱序无意义阴性序列(si-NC)、miR-331-3p寡核苷酸模拟物(miR-331-3p mimics)及阴性对照mimic NC序列(miR-NC)购自广州锐博生物科技有限公司；miR-331-3p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-331-3p)及阴性对照(anti-miR-NC)购自上海吉玛制药技术有限公司；甲基噻唑基四唑(methylthiazolyl tetrazolium ......