刘炳园 罗婷婷 刘柳芳

    心脑血管疾病已经成为威胁中老年人生命健康的重要原因，其中脑缺血再灌注损伤最为常见[1]。脑缺血再灌注损伤是由多种因素引起的，包括氧化应激、细胞凋亡等[2]。细胞内过量的氧自由基可以激活Caspase凋亡反应，促进细胞凋亡发生[3]。大黄素主要来源于蓼科植物掌叶大黄根茎，其是大黄的主要活性成份，大黄素属于蒽醌类衍生物，传统中医认为大黄素具有抗菌、消炎、保肝、抗肿瘤等功效[4]。大黄素还具有抗氧化功能，其可以清除机体内多余的氧自由基，促进氧化平衡[5]。以前的研究显示，大黄素处理后的脑缺血再灌注损伤大鼠模型脑组织中细胞凋亡水平降低，脑梗死面积减小，大黄素还可以改善大鼠记忆功能[6]。大黄素抑制过氧化氢诱导的PC12细胞损伤[7]。现阶段对于大黄素的作用机制还不明确，大黄素可以通过抑制核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)减轻巨噬细胞损伤和大鼠脊髓损伤[8,9]。本次实验以明确大黄素对缺氧缺糖/复氧复糖PC12细胞氧化应激和细胞凋亡的影响和机制为目的，以期为大黄素治疗脑缺血再灌注损伤提供理论资料。

    1 材料与方法

    1.1 材料 超氧化物歧化酶(SOD)含量检测试剂盒(WST-8法)购自北京普利莱基因技术有限公司；PC12细胞购自上海弘顺生物科技有限公司；谷胱甘肽(GSH)含量检测试剂盒(比色法)购自上海通蔚生物有限公司；大黄素购自上海宝曼生物科技有限公司；CCK-8细胞活力检测试剂盒购自大连美仑生物技术有限公司；乳酸脱氢酶(LDH)含量测定试剂盒(L-P法)购自上海岚派生物科技有限公司；NF-κBp65抗体购自湖南艾佳生物科技股份有限公司；丙二醛(MDA)含量检测试剂盒(TBA法)购自上海铭博生物科技有限公司；Cleaved Caspase-3抗体购自美国Abcam；活性氧(ROS)水平检测试剂盒(DCFH-DA法)购自上海联迈生物工程有限公司。

    1.2 实验分组处理方法

    1.2.1 PC12细胞用含有10%胎牛血清的High-DMEM细胞培养液培养，培养条件设置为：37℃，5% CO2培养箱。缺氧缺糖/复氧复糖模型构建方法[10]为：将PC12细胞种植到96孔板中 ......