周鉴基 王山 王太洪

    胃癌是最常见的恶性肿瘤之一，严重威胁人类生命健康。因此，探明胃癌发生发展的机制并寻找有效治疗靶点对改善胃癌患者预后十分重要。长链非编码RNA(long non-coding RNA，Lnc RNA)和微小RNA(microRNA，miRNA)是两类小分子单链非编码RNA，二者均参与调控细胞的增殖、凋亡、分化等生命过程，在肿瘤发生发展中起重要作用[1，2]。研究表明，Lnc RNA与miRNA间存在相互作用，共同影响肿瘤发生发展[3]。二磷酸腺苷依赖葡糖激酶反义RNA1(adenosine diphosphate dependent glucokinase antisense RNA 1，ADPGK-AS1)是一种新型的lncRNA。有报道，ADPGK-AS1在胃癌组织和细胞系中增加，其表达增加的胃癌患者预后较差，沉默ADPGK-AS1可抑制GC细胞增殖和迁移，可能为胃癌患者提供了新的预后生物标志物和治疗靶标[4]。但目前，ADPGK-AS1对胃癌细胞增殖、凋亡等恶性生物学行为影响的作用机制还未明确。DINAN生物信息学软件预测显示，ADPGK-AS1与miR-1301-3p的核苷酸序列存在互补配对位点，miR-1301-3p可能是ADPGK-AS1的靶基因。miR-1301-3p是一种miRNA，参与结直肠癌[5]、乳头状甲状腺癌[6]等肿瘤的发生发展。但目前，miR-1301-3p在胃癌中的作用及ADPGK-AS1与miR-1301-3p在胃癌中的相互作用笔者还未见相关报道。本研究首先检测胃癌细胞系AGS、HGC-27和Hs-746T中ADPGK-AS1和miR-1301-3p表达水平，并以HGC-27细胞为研究对象，观察沉默ADPGK-AS1、过表达miR-1301-3p及抑制miR-1301-3p对HGC-27细胞增殖和凋亡的影响。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 人胃黏膜上皮正常细胞系GES-1和胃癌细胞系AGS，HGC-27和Hs-746T(中国科学院上海细胞库)，胎牛血清(fetal bovine serum，FBS)、RPMI 1640培养基和LipofectamineTM2000试剂盒(北京索莱宝科技有限公司)，四甲基噻唑蓝(methylthiazoletrazolium，MTT)(美国Sigma公司)，Trizol试剂、逆转录试剂盒和PCR试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司)，PCR引物和兔抗剪切型聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(cleaved-poly adenosine diphosphate ribose polymerase ......