何瑾瑜 于姣

    肝癌是世界范围的严重威胁生命健康的恶性肿瘤，其发病率呈增长趋势[1]。肝癌的治疗主要采用手术、化疗、放疗等方法，但目前肝癌还不能根治，其中肝癌细胞对化疗药物的耐药性是影响肝癌治疗效果的重要原因[2]。索拉菲尼(Sorafenib，SFB)是一种双芳基尿素类口服多激酶抑制剂，是临床分子靶向治疗肝癌的常用药物。降低肝癌细胞耐药性对于提高治疗疗效具有积极意义。长链非编码RNA(long non-coding RNA，LncRNA)是一类长度超过200个核苷酸的单链非编码小分子RNA，其参与调控肿瘤细胞的耐药性，影响肿瘤治疗疗效[3]。MIR100HG是近年来新发现的一种LncRNA，研究显示，MIR100HG在胃癌、乳腺癌等多种肿瘤细胞中表达升高，其高表达促进肿瘤的发生发展[4]。目前，笔者还未见MIR100HG参与影响肝癌发生发展的相关报道。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度为18～25核苷酸的单链非编码小分子RNA，其在肿瘤的发生发展中起着重要作用[5]。生物信息学软件预测显示，miR-204-5p可能是MIR100HG的靶基因。研究显示，miR-204-5p在肝癌细胞中表降低，过表达miR-204-5p可抑制肝癌细胞增殖及细胞周期进程，并诱导细胞凋亡[6]。本研究探讨MIR100HG在肝癌细胞对SFB耐药性中的作用及能否通过调控miR-204-5p表达影响肝癌细胞的耐药性，以期为肝癌耐药性的改善提供新途径。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与试剂 Huh7细胞(中国科学院上海细胞库)，胎牛血清(Fetal Bovine Serum，FBS)和RPMI 1640培养基(美国Gibco公司)，四甲基噻唑蓝(methylthia-zoletrazolium，MTT)和胰蛋白酶(美国Sigma公司)，逆转录试剂盒和PCR试剂盒(深圳晶美生物工程有限公司)，miR-144-3p模拟物(mimics)及阴性对照(miR-NC)、miR-142-5p抑制剂(anti-miR-142-5p)及阴性对照(anti-miR-NC)、MIR100HG的小干扰RNA(si-MIR100HG)及阴性对照(si-NC)(上海吉凯基因公司)，Trizol试剂和LipofectamineTM2000试剂盒(美国Invitrogen公司)，PCR引物(上海生工生物工程有限公司)，二喹啉甲酸(bicinchoninicacid，BCA)蛋白检测试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)，鼠抗人细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21单克隆抗体(美国Santa Cruz公司) ......