胡仲辉 吴文博 赵庆涛 牛占丛 张霄鹏 张华 王会恩 袁征 段国辰

    肺癌在我国恶性肿瘤中发病率与死亡率居第一位[1]，其防治措施是当前研究的热点。缺氧诱导因子-1(HIF-1)是一种在缺氧条件下广泛存在于人和动物细胞内的细胞因子，对肿瘤生长、血管形成、转移、凋亡及耐药起重要作用。HIF-1由1个α和1个β亚单位组成，其中HIF-1α表达受细胞内氧浓度的高度调控，其存在一个氧依赖降解区(ODD)[2]，能感受外界氧浓度的变化；而HIF-1β不受氧浓度的影响。在肿瘤缺氧的微环境中，肿瘤细胞通过HIF-1α的高表达来维持其氧和代谢的稳定，促进自身的生长和转移。本实验通过人肺腺癌A549与人小细胞肺癌H446细胞株体外实验，研究HIF-1α对小细胞肺癌及非小细胞肺癌细胞凋亡、增殖的影响，以及HIF-1α表达与肺癌细胞Livin、Caspase-3表达的关系，探讨肺癌的发展机制，为肺癌治疗新靶点提供理论依据。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料

    1.1.1 细胞系：H446人小细胞肺癌与A549人肺腺癌细胞系购自武汉普诺赛生命科技有限公司。

    1.1.2 主要试剂：1640培养基(Hyclone,SH30809.01)；DMEM培养基(Hyclone,SH30526.01)；胎牛血清(四季青,11011-8611)；胰酶(Solarbio,T8150)；基质胶(CORNING，356234)；lipofectamine2000(invitrogen,11668-019)；PI-AnnexinV(MULTI SCIENCES，A91231)；lipofectamine2000(invitrogen,11668-019)；RIPA裂解液(北京索来宝公司，R0020)；一抗(博奥森公司)：Caspase3：bs-0081R，Livin：bs-0738R；二抗(中杉金桥公司，ZB2301)；ECL发光试剂盒(中杉金桥公司，sc-2048)。

    1.1.3 主要仪器:二氧化碳培养箱(Panasonic,MCO-18AC)；酶标仪(Thermo，MuLTiSKAN MK3)；6孔板(KIRGEN)；24孔板(NEST)；倒置显微镜(OLYMPUS,IX71)；T25细胞培养瓶(CORNING，430639)；流式细胞仪(BECKMAN COULTER)；Transwell小室(Costar，24219051)；超低温冰箱(SANYO,MDF-U72V)；0.22 μm一次性滤器(MILLEX,SLGP033RB)；低速离心机(时代北利 ......