高栋梁 高东东 白翠翠 杨波 杨喜明

    瘢痕疙瘩是皮肤纤维增生性疾病，是皮肤科和外科最常见的问题之一。瘢痕疙瘩常伴有疼痛、瘙痒、畸形甚至严重的功能损害，对患者危害极大[1]。由于对其发病机制认识不足，瘢痕疙瘩的治疗仍存在许多问题亟待解决。微小RNA(MicroRNA，miRNA/miR)是短的非编码RNA，在许多重要的生物学过程中起关键作用，包括细胞增殖、分化和凋亡。有研究已经通过miRNA微阵列在瘢痕疙瘩和正常皮肤(组织或细胞)之间识别了差异表达的miRNA[2]。然而，miRNA在瘢痕疙瘩中的功能和具体作用尚未阐明。越来越多的证据表明，miR-582-5p是一种肿瘤抑制因子，与各种癌症(子宫内膜癌、非小细胞肺癌、胃癌)的细胞增殖、凋亡和侵袭有关[3-5]。在哺乳动物细胞中，DNA甲基转移酶1(DNA Methyltransferase 1，DNMT1)是最丰富的DNA甲基转移酶[6]。DNMT1 mRNA和蛋白在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达较正常皮肤细胞升高，干扰其表达后细胞的增殖能力减弱，凋亡增强[7]。但miR-582-5p在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖、凋亡的影响，且miR-582-5p是否通过靶向调控DNMT1的表达影响瘢痕疙瘩成纤维的增殖和凋亡目前还尚未可知。因此，本研究观察miR-582-5p在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达，以及其在瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和凋亡中的作用，并结合DNMT1，对其潜在的作用机制进行探讨，为瘢痕疙瘩发病机制的深入研究奠定基础。

    1 材料与方法

    1.1 主要试剂 DMEM培养基(Dulbecco’s Modified Eagle Medium)购自美国Gibco公司，实时荧光定量PCR(Quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR)相关检测试剂盒购自日本TaKaRa公司，异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(Annexin Ⅴ-fluorescein isothiocyanate/propidium iodide，Annexin Ⅴ-FITC/PI)细胞凋亡检测试剂盒购自江苏凯基生物公司，二喹啉甲酸(Bicinchoninic acid，BCA)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)、DNMT1、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p21蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia 2 ......