董宝铁 李泓 高伟 周振东

    类风湿性关节炎(RA)是一种侵蚀软骨和骨的慢性炎症性自身免疫性疾病，确切发病机制目前尚不明确，是一个致残率较高的疾病，其主要病理特征是滑膜炎，RA滑膜成纤维细胞(RA-FLSs)是RA滑膜增生和侵袭的主要效应细胞，也是治疗的靶细胞[1]。有研究表明，在大鼠RA模型细胞中注射miRNA模拟物或siRNA，可减轻RA大鼠关节肿胀和关节炎指数，抑制RA-FLSs增殖和炎性反应[2]。有研究表明，与无RA的间质性肺病(ILD)患者相比，miR-214-5p在RA相关的ILD患者中表达上调[3]。miR-214-5p在前列腺癌和胰腺癌中表达均下调，与癌细胞的增殖、迁移和侵袭相关[4,5]。starBase预测发现，SEMA4C与miR-214-5p存在互补的位点。SEMA4C在结直肠癌中表达上调，可导致癌细胞的侵袭和迁移率的增加[6]。SEMA4C在RA中的表达及其与miR-214-5p的关系目前尚不清楚。本研究以RA患者关节置换术取出的滑膜组织中分离培养的RA-FLSs为研究对象，假设miR-214-5p靶向SEMA4C影响RA-FLSs细胞增殖和侵袭，并对此进行验证。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人类风湿性关节炎滑膜组织取自我院行关节置换术的RA患者；告知患者其滑膜组织的用途，与患者签署知情同意书，RA患者的临床诊断特征均符合美国风湿病学会标准。

    1.2 试剂与仪器 胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)和DMEM(dulbecco’s modified eagle medium)培养基(美国Gibco公司)，牛血清白蛋白(Bovine Serun Albumin,BSA)和胰蛋白酶Trypsin(美国Sigma-Aldrich公司)；Transwell板(美国Corning公司)；双荧光素酶报告系统(Dual-Luciferase Reporter Assay System)(美国Promega公司)；Lipofectamine 2000转染试剂、Total RNA提取试剂盒、real-time PCR 试剂盒、反转录试剂盒(RT-PCR)(美国Invitrogen公司)；SEMA4C抑制剂(si-SEMA4C)、SEMA4C过表达载体pcDNA-SEMA4C、miR-214-5p的模拟物(miR-214-5p)、miR-214-5p的干扰物(anti-miR-214-5p)、阴性对照(si-NC、miR-NC、anti-miR-NC、pcDNA-NC)和引物购自上海吉玛制药有限公司；CCK8试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)；BCA蛋白检测试剂盒(Thermo)；SEMA4C、CyclinD1、MMP-2、MMP-9抗体和β-actin抗体(美国Santa cruz公司)；全自动酶标仪及Real-time PCR仪(美国Bio-Rad公司) ......