杨正祥 谢陆莉 邓琳 王瑜

    正畸牙齿时移动的基础是牙周组织进行改建，在该过程中牙周膜发挥桥梁的重要作用，其最先能够感受到外界的作用力并且将该力传导至牙槽骨。牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts，PDLFs)是牙周膜中最主要的一种细胞，是牙周组织的再生以及形成新的附着的一种重要成分[1]。但是在牙周遭受创伤或者炎症时，牙周膜的再生细胞数量的减少以及其生物学功能的减弱阻碍了该牙周组织完全再生的能力[2]。自噬(Autophagy)即Ⅱ型程序性死亡，是一种新的细胞程序性死亡方式，对维持细胞内环境的稳定有重要作用。在该过程中，细胞中多余的或功能障碍的细胞器、蛋白质等经过溶酶体进行降解[3]。MicroRNAs(miRNA)是一种长度约22 nt的内源性表达的非编码RNA，在转录调控的过程中具有重要作用，能够与靶基因互相作用而调控基因的表达，参与细胞的生物学过程[4]。miR-145是新发现的一种miRNA，包括miR-145-3p和miR-145-5p两种结构，可以调控多种细胞的生物学过程[5]。本研究探讨miR-145-3p对HPDLFs细胞自噬过程的影响及其可能存在的作用机制。

    1 材料与方法

    1.1 HPDLFs的采集及培养 收集12～18岁因正畸需要减数而拔除的健康前磨牙，立即放入含有青-链霉素的预冷的DMEM培养液中。取牙根1/3处的牙周膜组织，加入4 ml含0.5 g/L胰蛋白酶的DMEM培养液于37℃恒温培养箱中消化20 min。然后用不含血清的DMEM培养液洗1次弃去上清，将组织块置于35 mm的培养皿中，并加入含有200 ml/L胎牛血清的DMEM培养液，将组织块上覆盖一片无菌盖玻片保证组织块与盖玻片之间的培养液充盈。37℃ CO2培养箱孵育4 h后，加1～2 ml培养液，继续培养，每3天换1次液。待细胞铺满培养皿底大约80%时，进行首次传代。按1∶3细胞计数传代，取第5代HPDLFs用于后续实验。

    1.2 材料与仪器

    1.2.1 材料：DMEM培养基购自美国Hyclone公司；胎牛血清(fetal calf serum，FBS)购自美国Gibco公司；miR-145-3p-mimic、miR-145-3p-inhibitor和miR-145-3p-NC由广州锐博生物公司合成；Lipofectamine 2000购自美国Invitrogen公司；青-链霉素、胰蛋白酶购自美国Sigma公司；蛋白定量试剂盒、Western Blot发光液购自美国Thermo公司；兔抗波形蛋白、鼠抗泛细胞角蛋白、兔抗Beclin-1、P62、LC3、HDAC4以及鼠抗GAPDH均购自美国Abcam公司；免疫组织化学试剂盒购自武汉博士德生物 ......