何智慧 黄丽 苏菊红 刘峰

    肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，全球肺癌的发病率和病死率均呈上升态势，尤其在中国等发展中国家[1,2]。晚期肺癌传统化疗的疗效有限，预后仍不容乐观，中位生存时间仅为8～10个月，1年生存率仅在40%左右[3]。微小RNA(microRNA，miRNA)是一类小分子非编码单链RNA，可在转录后水平与靶基因的3’非翻译区(3’untranslated region，3’UTR)结合，抑制靶mRNA翻译或降解靶mRNA，进而调控靶基因的表达，参与多种疾病的发生发展[4]。miR-4286位于人染色体8p23.1位点，已有研究证明miR-4286参与食管鳞癌[5]和胰腺癌[6]的调节。在肺癌细胞中miR-4286呈高表达，其高表达与肿瘤大小、淋巴结转移及TNM分期相关[7]。FOXO转录因子是叉头框(Forkhead box,FOX)家族中的一员，通过调节靶基因的转录，参与调控细胞周期、凋亡、分化等过程[8]。FOXO4是FOXO亚家族中的成员，在胃癌、大肠癌中的表达都有所下调或缺失，表明多种机制导致的FOXO4失活可能促进了肿瘤的发生发展[9,10]。本研究通过观察miR-4286在肺癌细胞中的表达及其是否通过调控FOXO4表达影响肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭，以期为肺癌细胞的靶向分子治疗提供新思路。

    1 材料与方法

    1.1 细胞系和主要试剂 人肺癌细胞系A549和人正常支气管上皮细胞系HBE(美国ATCC)；DMEM培养基、MTT试剂(美国Gibco公司)；胎牛血清、胰蛋白酶、青霉素和链霉素混合液(美国Abcam公司)；LipofectamineTM 2000转染试剂(美国Intvitrogen公司)；Trizol试剂、逆转录试剂盒(美国Thermo Fisher公司)；SYBR Green PCR Master Mix检测试剂盒(赛默飞世尔科技有限公司)；WT-FOXO4和MUT-FOXO4荧光素酶重组载体质粒(上海生工生物工程有限公司)；荧光素酶报告检测试剂盒(美国Promega公司)；FOXO4过表达重组载体质粒及空载质粒(北京赛百盛基因技术有限公司)；CyclinD1、P21、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9单抗及HRP标记的二抗(英国Abcam公司)；Transwell小室(美国Coring公司)；细胞裂解液、BCA试剂盒、超敏ECL发光试剂(碧云天生物技术研究所) ......