李萍 孙敏 吴伟

    类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种常见的慢性炎症性关节疾病，但如果不及时治疗，约40%～70%的患者最终将发展为残疾[1]。此外，RA还可引起肺部和心血管疾病[2，3]。滑膜成纤维细胞是RA发生的关键细胞，在免疫细胞或细胞因子刺激下，滑膜成纤维细胞的活化、炎性因子以及基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase，MMPs)的分泌是导致RA炎性、骨和软骨的破坏的直接机制[4]。既往研究表明，长链非编码RNA(long non-coding RNAs，lncRNA)与RA的发生发展密切相关[5]。lncRNA同源盒蛋白B8基因反义RNA3(HOXB-AS3)是近年发现的lncRNA。生物信息学分析显示，HOXB-AS3可能与miR-379-5p存在直接作用。miR-379-5p已被证实可抑制膀胱癌细胞的增殖、迁移和侵袭，发挥抑癌基因作用[6]。然而，HOXB-AS3能否靶向miR-379-5p在RA中发挥抗滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭作用尚未可知。本研究通过检测RA患者滑膜组织中HOXB-AS3和miR-379-5p的表达水平，分析HOXB-AS3对滑膜成纤维细胞增殖、迁移和侵袭的影响，以期为RA临床治疗提供新的靶点。

    1 材料与方法

    1.1 组织来源 选取2017年1月至2018年6月于我院进行全膝关节置换术的25例RA患者的滑膜组织标本(RA组)，男15例，女10例；年龄38～69岁。收集25例关节外伤患者(均无RA病史)关节置换手术的滑膜组织标本作为对照组，其中男20例，女5例；年龄43～70岁。排除标准：风湿性疾病、自身免疫性疾病、肿瘤、肝肾功能不全、妊娠或哺乳期及精神障碍等疾病。本研究经我院伦理委员会批准，并获得所有患者知情同意。

    1.2 细胞与试剂 关节炎成纤维细胞MH7A购于美国模式培养物保藏中心；miRNA逆转录试剂盒、SYBR Green Master Mix试剂盒购于北京天根生物科技公司；miR-379-5p模拟物(miR-379-5p mimics)、mimics阴性对照(miR-NC)、HOXB-AS3小干扰RNA(si-HOXB-AS3)、乱义无序阴性对照(si-NC)、miR-379-5p抑制物(anti-miR-379-5p)、抑制物阴性对照(anti-miR-NC)、PCR引物、野生型/突变型荧光素酶报告基因载体(WT/MUT-HOXB-AS3)由上海吉玛制药公司提供；细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit 8 ......