樊小宝 丁通 孙燕 吴冰 王晶 杜鹏

    糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病的常见并发症之一，临床特征以糖脂代谢紊乱、肾功能进行性减退、持续性蛋白尿为主，致残、致死率高，可导致终末期肾病，是引起糖尿病患者死亡的主要原因[1,2]。足细胞作为肾小球滤过屏障结构的主要构成部分，抑制肾内足细胞病理损伤是改善DN临床症状的关键[3]。PI3K/Akt/mTOR信号可调控细胞存活、凋亡及自噬、炎症、氧化应激等生理、病理过程，激活该通路可抑制炎性反应，减轻神经元凋亡，改善神经功能[4]，并可减轻自噬相关炎症，减轻肾小管上皮细胞凋亡，改善肾功能，保护肾组织免于损伤[5]。PI3K/Akt/mTOR信号可能是改善DN大鼠足细胞功能障碍的潜在治疗靶点。石斛碱是我国传统名贵中药石斛的主要活性成分，具有抗氧化、抗炎的功效，可滋阴益胃、清热生津，对糖尿病具有较好疗效[6]。研究发现，金钗石斛可抑制糖尿病大鼠肾组织TGF-β1表达，对肾脏发挥明显的保护作用[7]，石斛合剂能下调TNF-α及IL-6的表达，减轻肾内炎性反应，缓解肾脏损伤，进而延缓DN病情进展[8]。但石斛碱是否可影响DN大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路表达及足细胞功能障碍，目前还不清楚，本文通过建立DN大鼠模型，进行研究。

    1 材料与方法

    1.1 实验动物 SPF清洁级SD大鼠，广东省医学实验动物中心，动物质量合格证号44007200021086，生产许可证号SCXK(粤)2016-0002，雄性，体重200～240 g，饲养条件：温度22～25℃，相对湿度50%～60%，12 h/12 h间断照明，自由进食、饮水，环境保持清洁、安静、通风良好，在本院动物房中饲养1周后用于实验。

    1.2 主要试剂及仪器 石斛碱，上海士锋生物科技有限公司，货号EB07670；盐酸二甲双胍片，中美上海施贵宝制药有限公司，大鼠PCX ELISA试剂盒，路非凡生物科技公司，货号：YDE04398；大鼠nephrin ELISA试剂盒，上海恒斐生物科技有限公司，货号：CSB-E13957r-1；大鼠IL-6及TNF-α ELISA试剂盒、兔源GAPDH、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT、mTOR及p-mTOR一抗、羊抗兔二抗 ......