甘建雄 李智 赵煜辉 李鹏 李雪莲

    直肠癌是最常见的恶性消化道肿瘤之一，其死亡率位居恶性肿瘤第三位，仅次于肝癌和肺癌[1]。由于发病具有隐匿性，当患者出现便血、排便习惯改变等症状时往往处于中晚期或发生转移，侵袭和转移更是导致直肠癌患者死亡的主要原因。因此，寻找新的生物标记物，开发有效的治疗策略对延长直肠癌患者生存时间意义重大。据报道，多种微小RNA(microRNA，miRNA)通过诱导转录后基因沉默以调节细胞增殖、凋亡、迁移或药物敏感性参与直肠癌的发生发展。例如，miR-31[2]、miR-3174[3]在结肠癌肿瘤样本中表达上调，表现为致癌基因，而miR-144等[4]miRNA表达下调，表现为抑癌基因。miR-3127-5p是近年来发现的miRNA，既往研究表明miR-3127-5p在胶质瘤、非小细胞肺癌肿瘤样本中表达降低，过表达miR-3127-5p可抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭[5,6]。然而miR-3127-5p在直肠癌中的确切生物学作用笔者所见尚未有研究。本研究通过检测直肠癌组织样本中miR-3127-5p的表达水平，探究miR-3127-5p在肿瘤发生中的作用，以期为直肠癌临床诊疗提供新的靶点。

    1 材料与方法

    1.1 细胞株与试剂 人结肠癌细胞株SW1463购于美国模式培养物保藏中心；DMEM培养液、胎牛血清购于美国Hyclone公司；TRIzol试剂、放射免疫沉淀缓冲液购于北京索莱宝公司；逆转录试剂盒、SYBR Green Master Mix购于大连TaKaRa公司；细胞计数试剂盒8(Cell count kit 8，CCK-8)购于日本同仁生化研究所；Transwell小室和基质胶购于美国Corning公司；兔源三结构域蛋白家族28(tripartite motif 28，TRIM28)、p21、细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2，MMP-2)、MMP-9和磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-phosphate dehydrogenase，GAPDH)抗体以及山羊抗兔IgG购于美国Abcam公司；miR-3127-5p模拟物(miR-3127-5p mimics)及其阴性对照(miR-NC)、TRIM28小干扰RNA(si-TRIM28)及其阴性对照(si-NC)、空载质粒(pcDNA)、TRIM28过表达载体(pcDNA-TRIM28)的构建和测序由有南京金斯瑞公司提供 ......