王殿一 武峙璇

    喉返神经损伤主要发生在甲状腺手术中，是其常见的并发症，通过挤压、横断、结扎等多种途径均能导致喉返神经损伤。相关研究认为，喉返神经损伤，会因为带麻痹导致患者的声音产生嘶哑、呛咳，严重的患者会出现窒息，威胁生命[1]。轻度的喉返神经损伤会自行恢复，但是严重的喉返神经损伤会导致永久性麻痹。喉返神经损伤发病原因相对复杂，解剖结构较深[2]，因此寻找积极有效的关于喉返神经损伤诊断、治疗方案对患者具有重要作用。人第10号染色体缺失的磷酸及张力蛋白同源基因(phosphatase andtensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)属于内源性PI3K抑制剂，主要在神经元细胞核、细胞体、再生轴突中表达。有研究显示，通过抑制PTEN活性，有助于外周神经生长[3]。PTEN敲除后，通过调控PI3K/Akt外周神经修复信号通路，参与皮质脊髓神经再生过程[4]。本文研究下调PTEN表达对喉返神经挤压损伤模型大鼠干预作用及可能的相关机制，为临床治疗喉返神经挤压损伤提供新的研究思路。

    1 材料与方法

    1.1 试验动物 选取40只健康清洁级雄性大鼠，鼠龄6～9周，平均鼠龄(8.5±0.5)周；体重200～260 g，平均体重(230.6±15.5)g；由上海市第一人民医院动物实验中心提供[动物许可证号：SYXK(沪)2009-0086]。所有大鼠养殖在干净笼子里，3～5只为1笼，室温22～25℃，相对湿度40%～60%，自由饮食和饮水，饲养1周。

    1.2 主要试剂与仪器 PTEN腺病毒(上海赛业生物技术有限公司)；3%的戊巴比妥钠、PBS、Ficoll液(上海利康消毒高科技有限公司)；纤维喉镜(日本奥林巴斯)；SYBRPremixExTaq荧光定量PCR试剂盒(日本Takara)；PI3K、Akt、GSK-3β、CNTF、Myogenin一抗(美国NEB)；10%甲醛、凝胶缓冲液、TBST(上海生工生物技术有限公司)；透射电镜(荷兰飞利浦公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 喉返神经挤压损伤模型建立:参考吴涛等[5]的方法，将40只大鼠随机抽取30只，使用3%的40 mg/kg戊巴比妥钠给予腹腔麻醉，放置在无菌手术操作台上 ......