张岚 田荣

    瘢痕疙瘩是皮肤组织受损后异常愈合的一种皮肤瘤，主要原因在于皮肤成纤维细胞异常增殖导致细胞胶原分泌量增加进而促使结缔组织增生或变形最终形成瘢痕[1,2]。瘢痕疙瘩的形成已严重影响患者身心健康，目前临床主要采用手术、药物、激光等技术进行治疗，但治疗效果不佳，患者复发率高。研究表明促进成纤维细胞凋亡及抑制细胞增殖可有效改善瘢痕疙瘩[3]。因而基于瘢痕疙瘩形成的分子机制拟寻找治疗靶点从而提高治疗效果及降低复发率。微小RNA(microRNA，miRNA)可通过调控基因表达从而参与细胞增殖、凋亡等多种生物学过程，研究表明部分miRNA在瘢痕疙瘩中异常表达，并可调控多种基因表达，但关于其具体作用机制尚未阐明[4]。微小RNA-96-5p(microRNA-96-5p，miR-96-5p)可抑制肝细胞癌细胞凋亡，促进肿瘤发展进程[5]。研究表明miR-96-5p在宫颈癌中上调表达，抑制miR-96-5p表达可抑制宫颈癌进展[6]。但miR-96-5p在瘢痕疙瘩形成过程中的调控机制尚未可知。Starbase预测显示叉头样转录因子O4(forkhead box O4，FOXO4)可能是miR-96-5p的靶基因，研究表明FOXO4在非小细胞肺癌中呈低表达，并可促进肿瘤细胞转移[7]。目前miR-96-5p是否可通过调控FOXO4的表达参与瘢痕疙瘩形成过程尚未可知。本研究主要探讨miR-96-5p在瘢痕疙瘩成纤维细胞中的表达及其对细胞增殖、凋亡的影响，分析其对FOXO4的调控作用，旨在为瘢痕疙瘩的诊断及治疗提供新方向。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    1.1.1 瘢痕组织与正常皮肤组织来源：收集2017年6月至2018年3月我院外科需手术切除的瘢痕组织离体标本(30例)，收集患者临床病理资料，主要包括性别、年龄、皮损部位等，男16例，女14例；年龄20～35岁，平均年龄(25.54±5.46)岁。纳入标准：患者均符合临床诊断标准；向周围侵袭性生长超出原损伤范围；外科手术切除后复发；皮损部位无感染病灶。正常皮肤组织离体标本15例，其中男8例，女7例；年龄18～46岁，平均年龄(28.54±5.49)岁；患者接受皮肤外科手术中修整“猫耳”切除的正常皮肤组织作为正常组。本研究经医院伦理委员会批准，患者知情且签署同意书。

    1.1.2 试剂与仪器：杜氏改良培养基(DMEM)购自美国Gibco公司；胎牛血清、胰蛋白酶、Lipofectamine2000购自美国Thermo Fisher公司；miR-96-5p特异性寡核苷酸抑制剂(anti-miR-96-5p)及阴性对照(anti-miR-NC)、miR-96-5p模拟物(mimics)、阴性对照(miR-NC)、FOXO4小干扰RNA(si-FOXO4)、乱序无意义阴性对照(si-NC)购自广州锐博生物科技有限公司； pcDNA3.1购自上海远慕生物科技有限公司；Trizol试剂购自美国Invitrogen公司；反转录试剂盒与SYBR Green试剂盒购自北京天根生化科技有限公司；甲基噻唑基四唑(methylthiazolyl tetrazolium ......